[发明专利]基因多态性与重症患者预后的相关性及研究方法

权利要求书

1.CHGA-415/462基因多态性与重症患者预后具有相关性。

2.按照权利要求1所述CHGA-415/462基因多态性与重症患者预后具有相关性，其特征在于：-415位点突变组患者比野生组患者生存情况更差，具有更高的30d死亡率。

3.CHGA-415/462基因多态性与重症患者预后的相关性研究方法，其特征在于：首先准备全血总DNA提取试剂盒、DNATaq酶、DNA1000Maker以及引物，选择入住ICU的患者，对患者进行DNA提取并进行CHGA-415/462位点基因型分型；记录所有患者一般情况，对所有患者进行入住ICU第1d的危重症评分，以30d死亡率作为评估终点。

4.按照权利要求3所述CHGA-415/462基因多态性与重症患者预后的相关性研究方法，其特征在于：所述全血总DNA提取试剂盒为北京天根生化科技有限公司生产的血液基因组提取试剂盒，货号DP319，所述DNATaq酶、DNA1000Maker以及引物均购自大连宝生物工程有限公司，引物序列由Primer5软件设计：上游AGGGAAGGGAGAACAG，下游：CGTTGTCCAGAAGGCAGTAGG。

5.按照权利要求3所述CHGA-415/462基因多态性与重症患者预后的相关性研究方法，其特征在于：所述入住ICU的患者的选择，排除以下情况的患者：入住ICU不足24h；病例资料不全；未获得知情同意书签字；多次入住ICU患者；神经内分泌肿瘤及肿瘤晚期患者；心肺骤停后复苏；少数民族和外籍患者；DNA提取及PCR扩增实验失败的患者。

6.按照权利要求3所述CHGA-415/462基因多态性与重症患者预后的相关性研究方法，其特征在于：所述对患者进行DNA提取并进行CHGA-415/462位点基因型分型过程为患者入住ICU后24h内，收集患者外周静脉血5ml按照全血总DNA提取试剂盒说明书进行全血基因组提取，基因型的测定通过PCR目的片段扩增和基因测序判定，按照天根DNA萃取柱提取技术操作使用外周血1ml经蛋白酶K处理后提取DNA，DNA浓度为25～30ng/ml，使用70ngDNA作为模板用于目的片段扩增，PCR扩增体系：DNA1.5μl，上下游引物各1.0μl，DNATaq酶预混Mix12.5μl，ddH₂O8μl，目的片段长度为353bp，PCR扩增产物经1.5％琼脂糖凝胶电泳检测后进行测序，并进行-415/462SNP位点基因型鉴定，基因型测定为盲法执行。

7.按照权利要求3所述CHGA-415/462基因多态性与重症患者预后的相关性研究方法，其特征在于：所述记录所有患者一般情况包括年龄、性别、感染情况、有无感染、白细胞计数、降钙素原、呼吸功能相关情况、循环情况、肝肾指标；对所有患者进行入住ICU第1d的危重症评分：APACHEII评分、SAPSII评分、SOFA评分。