[发明专利]测定羊肉中残留镇静剂类兽药的方法

权利要求书

1.一种测定羊肉中残留镇静剂类兽药的方法，其特征在于包括以下步骤：

所述的残留镇静剂类兽药为唑吡坦、氟哌啶醇、氯氮卓、盐酸异丙嗪、硝西泮、盐酸氯丙嗪、奋乃静、盐酸氟奋乃静、氯硝西泮、盐酸甲苯噻嗪、丙酰丙嗪、咔唑心安、乙酰丙嗪、氟哌利多、阿扎哌隆；

(1)将羊肉绞碎、混合、均质，贮存于-18～-40℃备用；

(2)取出备用样品解冻至室温，准确称取4.5～5.5g羊肉样品于50mL聚丙烯离心管中，加入15mL10:90v/v的氨水-乙腈和30μLβ-葡萄糖醛苷酸酶≥100000units/mL，置于黑暗中，35～40℃旋涡、震摇8～12h后，30～40℃超声萃取10～15min，3500～4500r/min离心5～10min，移出上清液，残渣中加入15mL10:90，v/v氨水-乙腈，30～40℃超声萃取10～15min，3500～4500r/min离心5～10min；合并两次上清液，加入4.0～8.0g NaCl，充分混合，静置3～10min，移出上清液，于30～40℃减压浓缩至近干，加入1mL0.027mol L^-190:10v/v甲酸水溶液-乙腈涡旋至瓶内残渣全部溶解，过0.22～0.45μm有机相滤膜后，供分析测定；

(3)液相色谱-串联质谱仪检测：色谱柱：Acquity UPLC CSH^TM C₁₈；流动相：A为乙腈，B为0.027mol L^-1甲酸水溶液，0～15min，A10％→70％，15～16min，A70％→10％，流速0.3～0.5mL min^-1；进样量：5～20μL；ESI⁺电离模式；多级反应检测(MRM)；毛细管电压：+3.0～3.5kV；离子源温度：100～150℃；脱溶剂气温度：300～380℃；锥孔气流速：40～55L h^-1；脱溶剂气流速：450～550L h^-1；

(4)制备不同浓度的基质匹配标准工作液，依次进行步骤(3)，以峰面积对浓度进行线性回归，得到镇静剂类药物的线性回归方程和相关系数；

(5)将步骤(1)至(3)的样品色谱峰面积代入镇静剂类兽药基质匹配标准工作液的线性回归方程，检出结果。

2.如权利要求1所述的测定羊肉中残留镇静剂类兽药的方法，其特征在于还包括有在步骤(3)液相色谱-串联质谱仪检测中：所述的残留镇静剂类兽药阿扎哌隆定性离子对为328.4/121m/z；定量离子对为328.4/121m/z；驻留时间0.02～0.05ms；锥孔电压30～40V；碰撞能量25～35V；

在步骤(4)所述的残留镇静剂类兽药阿扎哌隆在5～50μg kg^-1浓度范围的线性回归方程和相关系数r²，为：y＝126.98x+114.03；r²＝0.9974；

其中：x为：基质匹配标准工作液浓度；y为：MRM色谱峰面积。

3.如权利要求1所述的测定羊肉中残留镇静剂类兽药的方法，其特征在于还包括有在步骤(3)液相色谱-串联质谱仪检测中：所述的残留镇静剂类兽药甲苯噻嗪定性离子对为221.1/163.75m/z；定量离子对为221.1/163.75m/z；驻留时间0.02～0.05ms；锥孔电压25～35V；碰撞能量30～40V；

在步骤(4)所述的残留镇静剂类兽药甲苯噻嗪在5～50μg kg^-1浓度范围的线性回归方程和相关系数r²为：y＝41.8489x+97.8894 r²＝0.9756；

其中：x为：基质匹配标准工作液浓度；y为：MRM色谱峰面积。