[发明专利]测定羊肉中残留镇静剂类兽药的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种检测肉类残留药物的方法，特别是涉及同时测定肉类中多个镇静剂类药物的方法。

背景技术

镇静剂(sedative)是指能使中枢神经系统产生轻度抑制，减弱机能活动，从而起到消除躁动不安、恢复安静的一类药物。近年来，个别畜牧业饲养者因经济利益的驱使，擅自在畜禽饲养过程中添加此类药物以起到镇静催眠、增重催肥、缩短出栏时间的作用；另外，在动物运输过程中，为减少动物死亡和体重下降，防止肉品质降低，也常使用此类药物以减少应激带来的损失。非法使用此类药物会使其原形和代谢产物不可避免地残留于动物源食品中，人们食用了这些食品后，肝脏负担加重，头脑长期昏沉，记忆受影响，同时运动神经和肌肉功能受到抑制，因此许多国家都将此类药物列为禁用药物。我国农业部第193号公告规定严禁在动物饲料和饮用水中使用此类药物，在动物源食品中不得检出此类药物。

目前，检测残留的镇静剂类药物的方法主要有液相色谱-串联质谱法(LC-MS-MS)、液相色谱法(HPLC)、气相色谱-质谱联用法(GC-MS)等。国标规定检测此类药物用液-质联用法，羊肉中镇静剂类药物残留量测定的方法仍未见报道。本发明采用快速高分辨液相色谱-串联质谱法(RRLC-MS/MS)同时测定羊肉中15种镇静剂类药物。

发明内容

本发明的主要目的是提供了一种测定羊肉中残留镇静剂类兽药的方法。本发明人通过高分辨液相色谱-串联质谱法检测方法从羊肉中测定15种镇静剂类药物残留量，该方法灵敏度高、回收率高，能满足兽药检测的需求。

本发明可通过以下步骤来实现：一种测定羊肉中残留镇静剂类兽药的方法，其主要特点在于包括以下步骤：

所述的残留镇静剂类兽药为唑吡坦、氟哌啶醇、氯氮卓、盐酸异丙嗪、硝西泮、盐酸氯丙嗪、奋乃静、盐酸氟奋乃静、氯硝西泮、盐酸甲苯噻嗪、丙酰丙嗪、咔唑心安、乙酰丙嗪、氟哌利多、阿扎哌隆；

(1)将羊肉绞碎、混合、均质，贮存于-18～-40℃备用；

(2)取出备用样品解冻至室温，准确称取4.5～5.5g羊肉样品于50mL聚丙烯离心管中，加入15mL10:90v/v的氨水-乙腈和30μLβ-葡萄糖醛苷酸酶≥100000units/mL，置于黑暗中，35～40℃旋涡、震摇8～12h后，30～40℃超声萃取10～15min，3500～4500r/min离心5～10min，移出上清液，残渣中加入15mL10:90，v/v氨水-乙腈，30～40℃超声萃取10～15min，3500～4500r/min离心5～10min；合并两次上清液，加入4.0～8.0g NaCl，充分混合，静置3～10min，移出上清液，于30～40℃减压浓缩至近干，加入1mL0.027mol L^-190:10v/v甲酸水溶液-乙腈涡旋至瓶内残渣全部溶解，过0.22～0.45μm有机相滤膜后，供分析测定；

(3)液相色谱-串联质谱仪检测：色谱柱：Acquity UPLC CSH^TM C₁₈；流动相：A为乙腈，B为0.027mol L^-1甲酸水溶液，0～15min，A10％→70％，15～16min，A70％→10％，流速0.3～0.5mL min^-1；进样量：5～20μL；ESI⁺电离模式；多级反应检测(MRM)；毛细管电压：+3.0～3.5kV；离子源温度：100～150℃；脱溶剂气温度：300～380℃；锥孔气流速：40～55L h^-1；脱溶剂气流速：450～550L h^-1；

(4)制备不同浓度的基质匹配标准工作液，依次进行步骤(3)，以峰面积对浓度进行线性回归，得到镇静剂类药物的线性回归方程和相关系数；

(5)将步骤(1)至(3)的样品色谱峰面积代入镇静剂类兽药基质匹配标准工作液的线性回归方程，检出结果。

所述的测定羊肉中残留镇静剂类兽药的方法，还包括有在步骤(3)液相色谱-串联质谱仪检测中：所述的残留镇静剂类兽药阿扎哌隆定性离子对为328.4/121m/z；定量离子对为328.4/121m/z；驻留时间0.02～0.05ms；锥孔电压30～40V；碰撞能量25～35V；

在步骤(4)所述的残留镇静剂类兽药阿扎哌隆在5～50μg kg^-1浓度范围的线性回归方程和相关系数r²，为：y＝126.98x+114.03；r²＝0.9974；