[发明专利]一种蟾酥药材中蟾蜍甾二烯类成分指纹图谱的检测方法及其应用

权利要求书

1.一种蟾酥药材中蟾蜍甾二烯类成分指纹图谱的检测方法，包括以下步骤：

1)供试品溶液的制备：称取蟾酥细粉，加入甲醇，称重，超声提取，冷却后，再称重，用甲醇补足失重，摇匀，过滤，取续滤液作为供试品溶液；

2)对照品溶液的制备：分别精密称取日蟾毒它灵、蟾毒它灵、蟾毒灵、华蟾酥毒基、脂蟾毒配基对照品适量，加甲醇溶解并定容，摇匀，得到混合对照品溶液；

3)测定：采用相同色谱条件的高效液相色谱法分别测定供试品溶液和对照品溶液，将获得的供试品溶液的液相色谱图，与对照品溶液的液相色谱图进行比较，根据相对保留时间，指认出5个共有特征峰，确认供试品溶液中5种蟾蜍甾二烯类成分的特征峰，从而获得供试品溶液中5种蟾蜍甾二烯类成分的指纹图谱。

2.根据权利要求1所述的一种蟾酥药材中蟾蜍甾二烯类成分指纹图谱的检测方法，其特征在于，所述步骤1)中，超声提取所加入的甲醇为蟾酥的100～200倍量；所述超声提取时间为20～45min。

3.根据权利要求1所述的一种蟾酥药材中蟾蜍甾二烯类成分指纹图谱的检测方法，其特征在于，如步骤2)所述对照品溶液中各成分的含量范围为：日蟾毒它灵151.2～226.8μg、蟾毒它灵225.6～451.2μg、蟾毒灵171.6～343.2μg、华蟾酥毒基460.0～9200.0μg、脂蟾毒配基394.4～788.8μg。

4.根据权利要求1所述的一种蟾酥药材中蟾蜍甾二烯类成分指纹图谱的检测方法，其特征在于，如步骤3)所述高效液相色谱法的色谱条件为：色谱柱：Agilent Zorbax SB-C₁₈；柱温：25～30℃，优选25℃；检测波长：296nm；流速：0.8～1.0ml/min，优选0.8ml/min；进样量：1～20μl，优选10μl；流动相：乙腈-0.5v/v％甲酸水溶液，其中，A相为乙腈，B相为0.5v/v％甲酸水溶液；分析时间：60min；梯度洗脱。

5.根据权利要求4所述的一种蟾酥药材中蟾蜍甾二烯类成分指纹图谱的检测方法，其特征在于，所述梯度洗脱以流动相A相：B相体积比为20：50-80：50梯度变化洗脱。

6.根据权利要求5所述的一种蟾酥药材中蟾蜍甾二烯类成分指纹图谱的检测方法，其特征在于，所述梯度洗脱的具体程序为：0～20min，A相：B相体积比为20：80-30：70；20～25min，A相：B相体积比为30：70-35：65；25～40min，A相：B相体积比为35：65-40：60；40～50min，A相：B相体积比为40：60-50：50；50～60min，A相：B相体积比为50：50。

7.根据权利要求1-6任一所述的一种蟾酥药材中蟾蜍甾二烯类成分指纹图谱的检测方法在蟾酥药材中5种蟾蜍甾二烯类成分含量测定中的应用。

8.一种蟾酥药材中5种蟾蜍甾二烯类成分含量的测定方法，包括以下步骤：

A)供试品溶液的制备：采用权利要求1-6任一权利要求所述蟾酥药材中蟾蜍甾二烯类成分指纹图谱的检测方法的步骤1)制备；

B)对照品溶液的制备：采用权利要求1-6任一权利要求所述蟾酥药材中蟾蜍甾二烯类成分指纹图谱的检测方法的步骤2)制备；

C)测定：采用高效液相色谱法在相同色谱条件下分别测定供试品溶液和对照品溶液，并采用外标法计算供试品溶液中5种蟾蜍甾二烯类成分的含量。

9.根据权利要求8所述的一种蟾酥药材中5种蟾蜍甾二烯类成分含量的测定方法，其特征在于，如步骤C)所述高效液相色谱法的色谱条件采用权利要求1-6任一权利要求所述蟾酥药材中蟾蜍甾二烯类成分指纹图谱的检测方法的色谱条件。