[发明专利]一种水蛭高F值寡肽及其酶解制备方法与应用

权利要求书

1.一种水蛭高F值寡肽的酶解制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

（1）将水蛭干燥体用清水洗净，并于去离子水中浸泡8~24h，再于分析纯乙醇中浸泡8~24h，干燥粉碎，得到水蛭干粉，置于-4~-20℃冷藏备用；

（2）称步骤（1）得到的水蛭干粉，加水溶解，按干粉与水重量比为1~8：100配制悬浊液，调整pH 至8~11，浸泡10~60min，再调节pH至7.5~11，加入碱性蛋白酶，反应温度保持在30~80℃，酶解1~6h；煮沸5~30min，灭酶活，冷却，4000~10000r/min离心5~20min，收集上清液，调节pH至7~10，加入木瓜蛋白酶，反应温度保持在25~80℃，酶解1~6h；煮沸5~30min，灭酶活，冷却，4000~10000r/min离心5~20min，收集上清液，调整pH至2~7，按活性炭重量与上清液体积比0.2~20g：100mL加入活性炭，在25~60℃下吸附30~100min，4000~10000r/min离心5~30min，收集上清液，过凝胶过滤层析，以去离子水洗脱，收集在214nm吸收值大于2，在280nm吸收值小于0.2，分子量在300—1500Da的洗脱液，富集浓缩，冷冻干燥，得到水蛭高F值寡肽。

2.根据权利要求1所述的水蛭高F值寡肽的酶解制备方法，其特征在于：所述的水蛭为宽体金线蛭Whitmania Pigra。

3.根据权利要求1所述的水蛭高F值寡肽的酶解制备方法，其特征在于：步骤（1）和步骤（2）中所述pH调至以8~11，调节pH至7.5~11，调节pH至7~10具体为：用0.1-2mol/L NaOH将pH调至所述pH值；所述收集上清液，调整pH至2~7具体为：用0.1-2mol/L的HCl将pH调至2~7。

4.根据权利要求1所述的水蛭高F值寡肽的酶解制备方法，其特征在于：所添加的碱性蛋白酶为Alcalase2.4L，酶活力3.9323×10⁵U/mL，所添加的木瓜蛋白酶为Papain，酶活力0.8231×10⁵U/g。

5.根据权利要求1所述的水蛭高F值寡肽的酶解制备方法，其特征在于：所述碱性蛋白酶添加量为4000~15000U/g pro，所述木瓜蛋白酶添加量为按2000~10000U/g pro。

6.根据权利要求1所述的水蛭高F值寡肽的酶解制备方法，其特征在于：所述碱性蛋白酶添加量为6000~13000U/g pro，所述木瓜蛋白酶添加量为2000~8000U/g pro。

7.根据权利要求1所述的水蛭高F值寡肽的酶解制备方法，其特征在于：所添加的活性炭为针剂型活性炭，添加活性炭重量与上清液体积比为0.5~10g：100mL。

8.根据权利要求1所述的水蛭高F值寡肽的酶解制备方法，其特征在于：步骤（2）中所述凝胶填料为Sephadex G-15。

9.由权利要求1-8任意一项所述的制备方法制备得到水蛭高F值寡肽，其特征在于：所述水蛭高F值寡肽的分子量在300—1500Da；所述F值为20.0—30.0。

10.权利要求9所述的水蛭高F值寡肽应用于制备高F值寡肽功能性食品，所述功能性食品为粉剂、片剂、口服液或胶囊。