[发明专利]一种制备葫芦素B的方法

说明书

技术领域

本发明属于医药技术领域，涉及一种天然产物葫芦素B的制备方法，具体涉及一种从植物中提取制备葫芦素B的方法。

背景技术

葫芦素B(Cucurbitacin B)，异名葫芦苦素B，Amarin，Fabacein II，分子式C₃₂H₄₆O₈，分子量542.75。

化学结构式

葫芦素B普遍存在于葫芦科多种植物中，目前市场上销售的葫芦素制剂中的葫芦素来源于葫芦科植物甜瓜(Cucumis melo L.)的干燥成熟果柄。

葫芦素B具有抗肝炎和抗肿瘤等生理活性。

现有技术中，多采用有机溶剂回流、渗漉提取和生物酶等提取法(专利“一种葫芦素B的提取分离方法”，申请号200910154837.0和专利“一种提取葫芦素B的方法”申请号201010235780.X)得到总葫芦素提取物，再通过大孔树脂柱或活性碳氧化铝柱等分离纯化手段获得。但这些方法在由植物提取一步中消耗大量溶剂，生产过程中污染严重，得到的提取物中杂质含量高，后续分离纯化过程复杂，不适于大生产。

发明内容

本发明的目的在于提供一种提取制备葫芦素B的新方法。

本发明是通过以下技术方案实现的：

采用超临界流体萃取法得到总葫芦素提取物，具体步骤包括：

1)将甜瓜蒂粉碎，过40目筛，置于萃取釜中，设定萃取压力10～35MPa，萃取温度30～55℃，解析釜I温度为35～60℃，解析釜II温度为室温，解析釜I、II压力均为系统压力，静态萃取10～30min后，再动态萃取10～30min(频率35KHz)，从解析釜I出料口得样品I；

2)从携带剂罐中加入2～5倍药材量(V/W)的有机溶剂，设定萃取压力20～45MPa，萃取温度35～70℃，解析釜I温度为40～75℃，解析釜II温度为35～70℃，解析釜I、II压力均为系统压力，动态萃取30～60min(频率35KHz)从解析釜I出料口得萃取液。减压回收溶剂并浓缩至稠膏，得到样品II。

3)从富含总葫芦素提取物的样品I、样品II分离纯化得到葫芦素B。

其中，携带剂罐中加入的有机溶剂为乙醇和/或醋酸乙酯或/丙酮。

葫芦素B的分离纯化方法为采用闪式硅胶和总葫芦素提取物混合，用三氯甲烷润湿，拌样，挥干溶剂，上样装柱，用有机溶剂系统快速洗脱闪式硅胶色谱柱(200～300)，收集洗脱液，根据TLC检测结果合并洗脱液，回收洗脱液，用乙醇溶解，放置，析晶。即得葫芦素B，含量大于90.0％。

有机溶剂洗脱系统为石油醚-醋酸乙酯(1:0.5～1)，优选石油醚-醋酸乙酯(3:2)，或三氯甲烷-醋酸乙酯(1:0.5～1)，优选三氯甲烷-醋酸乙酯(1:0.7)。

TLC检测采用GF254硅胶板，展开剂为三氯甲烷-醋酸乙酯(3:2)和石油醚-醋酸乙酯(1:1)。

葫芦素B的分离纯化方法也可以为采用制备HPLC法，所采用的制备色谱柱填料为正相硅胶柱也可以为反相C₁₈(5～15μm)，流动相正相系统为石油醚-乙酸乙酯，反相系统采用甲醇-水溶液，收集葫芦素B色谱峰洗脱液，回收洗脱液，浓缩，即得葫芦素B，含量大于95.0％。

在植物提取一步中采用超临界流体萃取法得到总葫芦素提取物，这种提取方法，不破坏植物中的天然化合物结构，且不用或用少量溶剂，生产过程中几乎无污染，得到的提取物中杂质含量低，有利于进一步的分离纯化。对得到的总葫芦素提取物采用闪式硅胶柱层析分离，洗脱系统用量少，毒性极低，适合大生产操作。葫芦素B的含量大于90.0％，且收率高。

具体实施方式

实施例1：

取甜瓜蒂2kg，粉碎，过40目筛，置于萃取釜中，设定萃取压力15MPa，萃取温度40℃，解析釜I温度为45℃，解析釜II温度为室温，解析釜I、II压力均为系统压力，静态萃取15min后，再动态萃取25min(频率35KHz)，从解析釜I出料口得样品I；2)从携带剂罐中加入2倍药材量(V/W)的乙醇，设定萃取压力25MPa，萃取温度45℃，解析釜I温度为50℃，解析釜II温度为45℃，解析釜I、II压力均为系统压力，动态萃取30min(频率35KHz)从解析釜I出料口得萃取液。减压回收溶剂并浓缩至稠膏，得到样品II。将I和II合并，即得总葫芦素提取物。