[发明专利]脐带间充质干细胞诱导培养为神经细胞的方法

权利要求书

1.一种脐带间充质干细胞诱导培养为神经细胞的方法，其特征在于包括以下步骤：

(1)、脐带间充质干细胞的培养和扩增：获得脐带间充质干细胞单体，将脐带间充质干细胞单体按1-5×10⁵/ml接种于脐带间充质干细胞培养液中，每3-8天换液传代一次，得到培养的细胞；

所述脐带间充质干细胞培养液含DMEM/F12，2％B27，2-4mM L-谷氨酰胺，1mM硫代甘油，1％非必需氨基酸，EGF20-40ng/ml，bFGF20-30ng/ml，80-90U/ml青霉素，60-70μg/ml链霉素；

(2)、预诱导分化：将步骤(1)得到的培养细胞按1～5×10⁴/ml的细胞密度接种进行贴壁诱导培养，贴壁培养3天后更换预诱导培养液进行培养，3天后半量换液，第3-4天时终止诱导；

所述预诱导培养液为DMEM作为基础培养基，在此基础上还含有20nmol～50nmol的维生素C，10-20U/ml人白细胞抑制因子，1-8mM L-谷氨酰胺，2-5mM硫代甘油，80-100U/ml青霉素，80-100μg/ml链霉素。

2.根据权利要求1所述的脐带间充质干细胞诱导培养为神经细胞的方法，其特征在于：还包括步骤(3)诱导分化：将步骤(2)得到的细胞按1～5×10⁴/ml的细胞密度接种进行贴壁诱导培养，贴壁培养2天后更换诱导培养液进行诱导培养，3天后半量换液，第3-6天时终止诱导，得到神经细胞；所述诱导培养液为DMEM作为基础培养基，在此基础上还含有20nmol～50nmol的维生素C，30nmol～40nmol的维生素B1，0.01-0.02％的二甲基亚砜，0.1mM2-β-巯基乙醇，10-20U/ml人白细胞抑制因子，10-30U/ml碱性成纤维细胞生长因子，1-8mM L-谷氨酰胺，2-5mM硫代甘油，80-100U/ml青霉素，80-100μg/ml链霉素。

3.根据权利要求2所述的脐带间充质干细胞诱导培养为神经细胞的方法，其特征在于：所述脐带间充质干细胞培养液含DMEM/F12，2％B27，4mM L-谷氨酰胺，1mM硫代甘油，1％非必需氨基酸，EGF20ng/ml，bFGF20ng/ml90U/ml青霉素，70μg/ml链霉素；所述预诱导培养液为DMEM作为基础培养基，在此基础上还含有50nmol的维生素C，20U/ml人白细胞抑制因子，8mM L-谷氨酰胺，5mM硫代甘油，80U/ml青霉素，80μg/ml链霉素；所述诱导培养液为DMEM作为基础培养基，在此基础上还含有50nmol的维生素C，30nmol的维生素B1，0.01％的二甲基亚砜，0.1mM2-β-巯基乙醇，10U/ml人白细胞抑制因子，30U/ml碱性成纤维细胞生长因子，8mM L-谷氨酰胺，5mM硫代甘油，100U/ml青霉素，100μg/ml链霉素。

4.根据权利要求1-3之一的方法培养得到的神经细胞。