[发明专利]鼠Bpifb5基因多克隆抗体及其制备方法

说明书

技术领域

本申请涉及一种鼠Bpifb5基因多克隆抗体及其制备方法。

背景技术

Bpifb5基因是一个新基因，研究表明，其在小鼠精子发生过程中具有一定的功能作用，因此，有必要对其进行更进一步的研究。

发明内容

本发明提供一种新的鼠Bpifb5基因多克隆抗体及其制备方法。

本发明提供一种鼠Bpifb5基因多克隆抗体的制备方法，包括如下步骤：

a)用PCR方法扩增序列如SEQIDNO:1所示的Bpifb5基因和序列如SEQIDNO:2所示的pET32a表达质粒；

b)将Bpifb5基因连接到pET32a表达载体中构建重组质粒；

c)将所述重组质粒转入BL21感受态细菌，经过培养、诱导、裂解和纯化，得到特异性目的蛋白；

d)免疫兔子后，采血，纯化抗体血清，得到多克隆抗体。

所述步骤a)中，PCR扩增时，基因Bpifb5上游引物如SEQIDNO:3所示，基因Bpifb5下游引物如SEQIDNO:4所示；质粒pET32a上游引物如SEQIDNO:5所示，质粒pET32a下游引物如SEQIDNO:6所示。

所述步骤c)中，培养时，将含有所述重组质粒的菌液加入到高压灭菌的无抗生素LB培养基中，并加入氨苄抗生素。

所述步骤c)中，通过IPTG诱导。

所述步骤c)中，利用裂解液进行裂解，所述裂解液包括TrisHCl、NaCl和EDTA。

所述步骤c)中，所述纯化包括包涵体蛋白处理和梯度透析。

一种鼠Bpifb5基因多克隆抗体，所述抗体识别的蛋白序列如SEQIDNO:7所示。

本发明的有益效果是：通过制备基因Bpifb5的多克隆抗体，该抗体能够特异性识别目的蛋白，从而便于研究目的蛋白的表达和定位等。

附图说明

图1是Bpifb5克隆鉴定图；

图2是SDS-PAGE表达分析图；

图3是表达蛋白的westernblot鉴定图；

图4是小鼠睾丸免疫组化图；

图5是空白对照图。

具体实施方式

下面通过具体实施方式结合附图对本发明作进一步详细说明。

在一种实施方式中，鼠Bpifb5基因多克隆抗体的制备方法包括如下步骤：

a)用PCR方法扩增序列如SEQIDNO:1所示的Bpifb5基因和序列如SEQIDNO:2所示的pET32a表达质粒；其中，Bpifb5基因序列是现有序列，其登录信息是：NM_144890，该基因的蛋白序列如SEQIDNO:8所示，其登录号是：NP_659139。

b)将Bpifb5基因连接到pET32a表达载体中构建重组质粒；连接时，可以采用T4连接酶。

c)将所述重组质粒转入BL21感受态细菌，经过培养、诱导、裂解和纯化，得到特异性目的蛋白。

d)免疫兔子后，采血，纯化抗体血清，得到多克隆抗体。

如图1至图5所示，在另一种实施方式中，鼠Bpifb5基因多克隆抗体的制备方法包括如下步骤：

1、通过不依赖连接酶的克隆方法(LIC)重组质粒

a)设计质粒pET32a以及基因Bpifb5mRNA的引物，引物如表1所示：

表1质粒pET32a和基因Bpifb5的合成引物

b)通过PCR的方法扩增目的片段Bpifb5和表达质粒pET32a(采用TAKARA公司的PrimeSTARGXLDNAPolymerase)，GXL高保真PCR反应体系如表2所示：

表2：PCR反应体系