[发明专利]一种丙型肝炎病毒基因分型的试剂盒

权利要求书

1.一种丙型肝炎病毒基因分型的试剂盒，包括PCR反应液和DNA杂交膜条，其特征在于，所述DNA杂交膜条包括尼龙膜，所述尼龙膜上固定有探针，所述探针为分别与丙型肝炎病毒各种亚型病毒的核酸杂交的核苷酸，所述探针序列如下所示：

针对HCV1a型设计探针Y1：5’-GCAGGGGCCCTAGATTGGGT-3’；

针对HCV1b型设计探针Y2：5’-CGTGGAAGGCGACAACCTA-3’；

针对HCV1b型设计探针Y3：5’-AACCTCGTGGAAGGCGACAACC-3’；

针对HCV2a型设计探针Y4：5’-ATTGCCGGGAAGACTGGGTC-3’；

针对HCV2a型设计探针Y5：5’-ACTTCGGAGCGGTCCCA-3’；

针对HCV2b型设计探针Y6：5’-CAGCCCATCCCGAAAGATCGG-3’；

针对HCV2b型设计探针Y7：5’-GAATTACCGGAAAGACTGGGT-3’；

针对HCV3a型设计探针Y8：5’-AATCGCTGGGGTGACCGG-3’；

针对HCV3a型设计探针Y9：5’-TCTGAACGGTCACAGCCTC-3’；

针对HCV3a型设计探针Y10：5’-CCCGCGAGATCACTAGCC-3’；

针对HCV3b型设计探针Y11：5’-CGCTCAATGCCCGGAAATT-3’；

针对HCV6a型设计探针Y12：5’-GACCGGGTCCTTTCCATTGG-3’；

针对HCV6a型设计探针Y13：5’-GAGCGATCCCAGCCCAGAG-3’；

针对HCV6a型设计探针Y14：5’-GAACGGTCCCAGCCCAGAG-3’；

针对HCV1-6型设计通用探针Y15：5’-TTGGGTGTGCGCGCGAC-3’；

阴性探针HN:5’-GGTCCTGTTTAACTGGCG-3’；

所述探针5’端进行氨基标记以与尼龙膜偶联。

2.如权利要求1所述的丙型肝炎病毒基因分型的试剂盒，其特征在于，所述PCR反应液包括扩增丙型肝炎病毒各种亚型病毒的核酸的引物，所述引物序列如下所示：

逆转录引物RT：5’-GAAAGCGTCTAGCCATGGCGTTAGT-3’；

上游引物F1：5’-GAAAGCGTCTAGCCATGGCGTTAGT-3’；

下游引物R1：5’-CGCAAGCACCCTATCAGGCAGTA-3’；

上游引物F2：5’-TGGTCAGATCGTYGGYGGAGT-3’；

下游引物R2：5’-ACGAGCGGAATGTACCCCATGAG-3’；

所述下游引物R1、R2的5’端进行生物素标记。

3.如权利要求2所述的丙型肝炎病毒基因分型的试剂盒，其特征在于，所述上游引物F2中Y为简并引物，所述Y＝T/C。

4.如权利要求1所述的丙型肝炎病毒基因分型的试剂盒，其特征在于，所述尼龙膜上还设置有显色控制探针CC，所述显色控制探针CC序列如下所示：5’-GCGCAGGGCCACAATAATGG-3’，所述显色控制探针CC的5’端进行氨基标记，3’端进行生物素标记。

5.如权利要求1所述的丙型肝炎病毒基因分型的试剂盒，其特征在于，所述PCR反应液还包括内参系统，所述内参照系统为拟南芥内参照系统，所述内参照系统包括：

内参引物F：5’-TCATCGTCGCTGGAGCTGGTT-3’；

内参引物R：5’-CGGCGGTTTGTCAAGCTGAT-3’；

内参探针PC：5’-TGCCGATATAGGTCACAGCATGGGC-3’；

所述内参引物F的5’端进行生物素标记。

6.如权利要求1所述的丙型肝炎病毒基因分型的试剂盒，其特征在于，所述探针浓度为5-20μM。

7.如权利要求1所述的丙型肝炎病毒基因分型的试剂盒，其特征在于，所述PCR反应液还包括10倍PCR缓冲液、25mM MgCl2、10mM dNTP和酶类，所述酶类为逆转录酶或Taq酶。