[发明专利]一种铁皮石斛的单倍体育种方法

权利要求书

1.一种铁皮石斛的单倍体育种方法，其特征在于：其包括下述步骤：

a.取铁皮石斛开花3-6天的花朵，培养前在常温下接种花粉后在低温4℃的花药愈伤组织诱导培养基中处理45-50小时，再进行常规培养；

b.用浓度为5％-6％的NaCIO溶液灭菌15分钟，无菌水冲洗5次，将消毒后的花蕾在无菌环境下剥出花药，尽量防止花药受到伤害，接种于花药愈伤组织诱导培养基中，用保鲜膜封口；

c.在25℃下进行黑暗恒温培养，2-3天，再在进行黑暗震荡培养12-15天，得到胚状体；

d.收集胚状体，接种至分化培养基，再在组培室中光照培养12小时/天，温度控制在24-26℃；待植株发育良好，开盖炼苗5天；炼苗后移入营养基质中培养，得到单倍体植株；

e.用秋水仙碱对单倍体植株的根系进行加倍处理，利用流式细胞仪对所有幼苗新长出的叶片进行倍性分析，如果是单倍体则进行秋水仙碱加倍处理；植株恢复正常后移入大田进行正常栽培。

2.根据权利要求1所述的一种铁皮石斛的单倍体育种方法，其特征在于：步骤a中花朵培养前在常温下接种花粉后在低温4℃的花药愈伤组织诱导培养基中处理的时间为48小时。

3.根据权利要求1所述的一种铁皮石斛的单倍体育种方法，其特征在于：步骤b中NaCIO溶液的浓度为5.6％。

4.根据权利要求1所述的一种铁皮石斛的单倍体育种方法，其特征在于：所述花药愈伤组织诱导培养基的配方为：MS+2％BA+1.5％NAA。

5.根据权利要求1所述的一种铁皮石斛的单倍体育种方法，其特征在于：所述分化培养基的配方为：1/2MS+0.5％BA+1％NAA。

6.根据权利要求1所述的一种铁皮石斛的单倍体育种方法，其特征在于：步骤e中在幼苗健壮时采用浓度为150～300mg/L的秋水仙碱溶液进行根系浸根处理15—30h。

7.根据权利要求6所述的一种铁皮石斛的单倍体育种方法，其特征在于：在幼苗健壮时采用浓度为150mg/L的秋水仙碱溶液进行根系浸根处理30h。

8.根据权利要求6所述的一种铁皮石斛的单倍体育种方法，其特征在于：在幼苗健壮时采用浓度为300mg/L的秋水仙碱溶液进行根系浸根处理15h。

9.根据权利要求4或5所述的一种铁皮石斛的单倍体育种方法，其特征在于：所述MS培养基的配方为：