[发明专利]一种提高α-葡萄糖基化丁香酚产量的方法

权利要求书

1.一种提高α-葡萄糖基化丁香酚产量的方法，其特征为：用大孔吸附树脂对反应底物丁香酚进行固定化，然后用野油菜黄单胞菌（Xanthomonas campestris）CGMCC NO.1243发酵液催化丁香酚合成α-葡萄糖基化丁香酚，该方法由下列工艺步骤组成：

树脂固定化丁香酚的制备；

野油菜黄单胞菌（Xanthomonas campestris）CGMCC NO.1243斜面种子的制备和液体发酵；

加入麦芽糖和树脂固定的丁香酚进行反应；

α-葡萄糖基化丁香酚分离纯化。

2.根据权利要求1所述的一种提高α-葡萄糖基化丁香酚产量的方法，其特征为：所述的（1）步骤中固定化丁香酚的制备是利用大孔吸附树脂吸附制备，其步骤为：先将丁香酚溶于95%浓度的乙醇，再制得质量百分比浓度为2-15%的丁香酚水溶液，然后在每100 ml丁香酚水溶液中加入10 g树脂进行吸附；吸附后用10%浓度酒精冲洗树脂表面丁香酚，再用去离子水冲洗，制得吸附量为0.1-0.8g丁香酚/g树脂的固定化丁香酚。

3.根据权利要求2所述的一种提高α-葡萄糖基化丁香酚产量的方法，其特征在于：本发明所采用的大孔吸附树脂为非极性树脂，中等极性树脂或极性树脂。

4.根据权利要求1所述的一种提高α-葡萄糖基化丁香酚产量的方法，其特征为：所述（2）步骤中的种子培养基及发酵培养基由下列重量份组分组成：蔗糖10-50份，蛋白胨2-12份，酵母粉1-6份，氯化钠1-2份，碳酸氢钠1-2份，三水合磷酸氢二钾1-2份，七水合硫酸镁1-2份，水1000份和琼脂10-20份（固体加，液体不加）。

5.根据权利要求1所述的一种提高α-葡萄糖基化丁香酚产量的方法，其特征为：所述（2）步骤中的斜面种子的条件为：温度为15-35℃，培养15-45小时；液体发酵的工艺为：挑取一定量斜面种子，加入到50ml的液体培养基中，在温度为25-35℃，转速为100-200转/分钟的摇床中培养12-36小时。

6.根据权利要求1所述的一种提高α-葡萄糖基化丁香酚产量的方法，其特征为：所述的（3）步骤中的反应条件为：在50ml发酵液中加入固定了丁香酚的树脂和麦芽糖，其中树脂的浓度为10-100 g树脂/L发酵液，麦芽糖的物质的量浓度为200-1000 mmol/L；在反应温度为25-45℃，转速为150-250转/分钟的条件下反应48-96小时。

7.根据权利要求1所述的一种提高α-葡萄糖基化丁香酚产量的方法，其特征为：所述的（4）步骤的α-葡萄糖基化丁香酚的分离纯化包括以下三个步骤：

将发酵液过滤得到树脂，用去离子水将树脂表面发酵液冲洗干净；

把洗涤后的树脂用体积浓度为10-80%的酒精进行洗脱，同时收集洗脱液；

将第二步中的洗脱液进行旋转蒸发，旋转蒸发的温度为50-70℃，真空度为0.1MP，浓缩时间为2-6小时，在浓度到产品到饱和状态时，放入温度为0-4℃进行结晶，结晶经干燥后可得到纯度在98%以上的α-葡萄糖基化丁香酚产品。

8.野油菜黄单胞菌（Xanthomonas campestris）CGMCC NO.1243。