[发明专利]一种血液降解得到并检测单糖的方法在癌症检测中的应用

说明书

技术领域

本发明属于医药领域，涉及一种血液降解得到并检测单糖的方法在癌症检测中的应用。

背景技术

癌症是全世界首要的死因之一。2004年，癌症死亡人数达740万(约占所有死亡人数的13％)，肺癌、胃癌、结肠癌、肝癌和乳腺癌是每年大多数癌症死亡的罪魁祸首。据世卫组织估计，如不进行干预，2005年至2015年期间将有8400万人死于癌症。癌症是细胞不受控制的增长和扩散。它可影响人体的几乎任何部分。肿瘤常常侵入周围的组织并可转移到其它部位。通过手术、放疗或化疗，很大一部分癌症可以治愈，尤其如果在早期发现。对于那些在癌细胞扩散之前就被发现并接受治疗的早期肺癌病人，平均生存率令人满意；但70％～80％癌证患者当出现临床症状就诊时已是中、晚期，失去了治愈机会，生存率很低。

癌症的诊断方法包括影像学检查，病理学检查等，均是在癌症充分发展、肿瘤足够大时，方可有效地诊断。因此，提高癌症的治疗效果、降低死亡率的关键是早期检测。最理想的早期检测是不需活检的血液分析。以实验数据为依据的理论分析指出，目前依靠肿瘤分泌到血液中的癌细胞生物标志物进行癌症诊断要求肿瘤不小于20.44mm³，此时肿瘤已有10.1年的生长历史。因此，最理想的状态是在肿瘤还未长到20.44mm³时就能通过常规体检抽血进行早期血液检测。提高血液中癌生物标志物的检测灵敏度，使早期检测成为可能则需要新思路。

生物信息传递过程是从DNA到RNA再到蛋白。人类基因的数目约为25000个，每个基因对应着相应的蛋白。蛋白形成以后，会合成糖、脂及各种化合物。反过来，蛋白又受到200多种糖、脂及各种化合物的修饰。蛋白的许多功能由这些修饰所决定。组学研究已找到了系列可能的癌症标记物，但离临床应用还有距离。检测癌症病人血液中MicroRNA对多种癌症显示出高度的选择性。然而对早期癌症病人的灵敏度远不如晚期病人，这也许会限制此方法在癌症早期诊断的应用。总体来说，组学分析比现行的癌症生物标志物全面，但一般来说复杂、昂贵、且需大量的数据处理，目前还达不到简单，快速，稳定，可靠、廉价的临床要求。

目前已有多种癌症血液糖生物标志物的报导，然而利用现行的多步骤的分离与鉴定技术从多于7000个糖结构中找出灵敏度与选择性都符合临床要求的癌症早期诊断的血液生物标志物非常困难，很难在短期内有临床应用价值。

发明内容

鉴于此，本发明的目的在于：提供一种血液降解得到并检测单糖的方法在癌症检测中的应用，特别是用于检测癌症病人或正常人血液降解后所得单糖的含量。同时测定血液中的单糖，如葡萄糖，及降解后产生的单糖，包括葡萄糖、甘露糖、半乳糖，氨基葡萄糖，氨基半乳糖，木糖，岩藻糖，葡萄糖醛酸，可以得到更全面的癌症病人血液的糖结构变化信息，可以区分正常人和癌症病人，还可区分不同癌症。

本发明的目的通过以下技术方案实现：

1.一种血液降解得到并检测单糖的方法在癌症检测中的应用，所述的降解得到并检测单糖的方法步骤包括：

(1)取样品至安瓿瓶，每管加1mL2M C₂HF₃O₂；

(2)封管，105℃油浴6h，得水解样品溶液；

(3)将水解样品溶液冷却至室温，冷凝浓缩除C₂HF₃O₂；

(4)每管加100uL甲醇，离心浓缩除残留C₂HF₃O₂，重复三次；

(5)得到的干燥样品每管用水溶，再加NH₃·H₂O调pH至8-14，充分混匀后在室温下静置，再加入1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)水浴；

(6)取出反应物冷却至室温，加HAc中和；

(7)每管加入CHCl₃萃取后弃下层CHCl₃层，重复三次，将得到的水层过0.22um滤膜，待用于高效液相色谱分析；

色谱条件

色谱柱：ZORBAX SB-C18，0.1M磷酸盐(13.6gKH₂PO₄，1.8gNaOH)(pH6.7)缓冲液-乙腈(体积比83∶17)等度洗脱，流速：1.0mL/min，检测波长：245nm，进样体积：20uL；