[发明专利]全悬浮培养细胞制造禽流感灭活疫苗工艺及产品

权利要求书

1.全悬浮培养细胞制造禽流感灭活疫苗工艺，其特征在于，包括如下步骤：

(1)全悬浮培养MDCK细胞；

(2)利用步骤(1)培养的MDCK细胞全悬浮培养生产禽流感病毒；

(3)禽流感病毒液的澄清、灭活、除菌、浓缩纯化；

(4)将收获的病毒液乳化制成疫苗成品。

2.根据权利要求1所述的全悬浮培养细胞制造禽流感灭活疫苗工艺，其特征在于：

在步骤(1)中，所述的全悬浮培养MDCK细胞，通过以下培养条件制得：全悬浮MDCK细胞以0.5×10⁶个/ml的密度接种生物反应器，MDCK细胞培养温度为36～37℃，pH值为6.8～7.2，溶氧为40％～70％。

3.根据权利要求1或2所述的全悬浮培养细胞制造禽流感灭活疫苗工艺，其特征在于：

在所述步骤(2)中，利用步骤(1)培养的MDCK细胞全悬浮培养生产禽流感病毒的方法为：接种前MDCK细胞密度要大于3.0×10⁶个/ml，利用旋转过滤器截留细胞，更换培养基，最终为含0.5～2.0％新生牛血清的营养液，将禽流感病毒接种入反应器中，接种剂量为培养基终体积的1.0～5.0％，其中，禽流感病毒培养温度为32℃～37℃；禽流感病毒培养pH值为6.8～7.2，溶氧为40％～70％；累计培养36～72h，收获病毒液。

4.根据权利要求2所述的全悬浮培养细胞制造禽流感灭活疫苗工艺，其特征在于：在所述步骤(1)中，接种生物反应器的全悬浮MDCK细胞通过以下方法制备：从液氮中取出冻存的全悬浮MDCK细胞株，直接用摇瓶悬浮培养传代，扩增至生物反应器所需体积和浓度。

5.根据权利要求3所述的全悬浮培养细胞制造禽流感灭活疫苗工艺，其特征在于：所述的用于禽流感病毒接种的禽流感种毒为H5N1亚型或者H9N2亚型。

6.根据权利要求3所述的全悬浮培养细胞制造禽流感灭活疫苗工艺，其特征在于：所述的用于禽流感病毒生产接种的禽流感种毒为H5N1鸡胚毒或者H9N2鸡胚毒。

7.根据权利要求3所述的全悬浮培养细胞制造禽流感灭活疫苗工艺，其特征在于：所述禽流感病毒液的澄清是通过连续流离心机离心完成；所述禽流感病毒液的浓缩纯化为超滤浓缩纯化，通过750K中空纤维超滤浓缩系统完成。

8.根据权利要求3所述的全悬浮培养细胞制造禽流感灭活疫苗工艺，其特征在于：所述禽流感病毒液的灭活通过甲醛灭活，所述禽流感病毒液的除菌采用0.2um的囊式滤器过滤除菌。

9.一种禽流感灭活疫苗，其特征在于：其通过权利要求1～8任一项所述的工艺得到。