[发明专利]一种快速人工接种离体鉴定百合灰霉病抗性的方法

权利要求书

1.一种快速人工接种离体鉴定百合灰霉病抗性的方法，其特征在于：

A.培养容器准备：采用平板培养皿作为离体培养容器，在培养皿中放置滤纸2-3张；

B.培养基配制：采用马铃薯燕麦淀粉培养基培养百合灰霉病菌，高压灭菌锅121-125℃灭菌25分钟，超净工作台上将灭菌后的培养基分装到平板培养皿中，静置放凉；

C.待测百合的采集：选取现蕾初期的健康且无百合灰霉病病原菌感染的百合株苗，其上须有6-9片健康叶片，分别从上、中、下3个部位剪取完整的百合叶片；

D.病原菌采集：取百合典型感病叶片，分离纯化病原菌，经鉴定是灰霉菌后，在马铃薯燕麦淀粉培养基上培养7d，用于接种健康的百合叶片；

E.接种方法：采用以下的菌丝块接种法，孢子液喷雾接种法或摩擦接种法来接种百合灰霉病原菌；

所述菌丝块接种法：用直径为0.5cm的打孔器将在马铃薯燕麦淀粉培养基上生长7d的灰霉菌打成菌丝块，将其接种于待测百合叶片；

所述孢子液喷雾接种法：用无菌水将在马铃薯燕麦淀粉培养基上生长7d的灰霉菌孢子洗出，并调成浓度为1×10⁵~5×10⁵ cfu/mL的菌悬液，喷雾接种于待测百合叶片；

所述摩擦接种法：挑取马铃薯燕麦淀粉培养基上生长7d的灰霉病原菌与适量石英砂及无菌水混合均匀，用无菌的小指形管沾取调制好的孢子叶，避开主叶脉涂抹于待测叶片上，摩擦数次至形成细小的伤口；

F.培养：接种好病原菌的百合叶片叶柄伤口处用湿润的棉花包裹，将接种好的百合叶片置于培养皿中，喷洒适量无菌水，于25℃（常温）条件下保湿培养；

G.观察鉴定：分别于3、5、7、9d调查叶片发病情况。

2.根据权利要求1所述的人工接种离体鉴定百合灰霉病抗性的方法，其特征在于：在E.接种方法中，选择菌丝接种法接种。

3.根据权利要求1所述的人工接种离体鉴定百合灰霉病抗性的方法，其特征在于：所述的平板培养皿为9cm平板培养皿。