[发明专利]一种快速人工接种离体鉴定百合灰霉病抗性的方法

说明书

技术领域

本发明属于花卉抗病性鉴定技术领域，具体涉及一种快速人工接种离体鉴定百合灰霉病抗性的方法。

背景技术

百合(Liliumspp.)是百合科百合属多年生草本球根植物，主要分布在亚洲东部、欧洲、北美洲等北半球温带地区，全球已发现有上百个品种，其中55种产于中国,中国是其最主要的起源地。百合除传统药用、食用和提取香精外，由于其花姿优美,气度不凡,已是目前世界上最受欢迎的鲜切花之一。百合灰霉病(Botrytis cinerea)是百合地上部的主要病害，是抑制百合生产的重要因素之一。

百合灰霉病病原菌为椭圆葡萄孢(Botrytis elliptica(Berk.) Cooke.)。每年6-8月，为灰霉病多发季节，田间百合叶片枯死，花器褐腐，茎杆发黑，后期似火烧一样。病株地下鳞茎提早停止生长，导致产量下降，品质变劣， 严重制约了百合生产和发展。一般产量损失20%~30%,严重流行时可造成失收。

不同百合品种对百合灰霉病的感、抗程度不同，目前鉴定百合抗病性的调查方法多以田间喷雾处理为主，此法易受温度、湿度、光照、空气传播等不定因素影响，造成鉴定结果不准确并且较难估计观察时间。由于灰霉病原菌可在土壤及各种植体上存活生长，在寄主被害部或以菌核遗留在土壤中越冬，故开放式活体接种易造成该病的扩散。因此采用一种可控的、科学有效的方法评价和鉴定不同百合品种的抗病性，对于抗源材料的筛选、抗病品种的选育和抗性品种的利用具有十分重要的意义。

长期以来，由于没有筛选到抗源材料，致使百合抗灰霉病的育种工作进展缓慢。综上可见，如果能找到离体条件下安全、快速的鉴定百合对百合灰霉病抗性的方法，可为筛选抗病百合资源提供科学、有效的评价方法。

发明内容

本发明的目的是提供一种快速人工接种离体鉴定百合灰霉病抗性的方法，高效地鉴定不同百合品种对于百合灰霉病的抗性。

本发明提供的技术方案如下：

A.培养容器准备：采用平板培养皿作为离体培养容器，在培养皿中放置滤纸2-3张。

B.培养基配制：采用马铃薯燕麦淀粉培养基培养百合灰霉病菌，高压灭菌锅121℃灭菌25分钟，超净工作台上将灭菌后的培养基分装到平板培养皿中，静置放凉。

C.待测百合的采集：选取现蕾初期的健康且无百合灰霉病病原菌感染的百合株苗，其上须有6-9片健康叶片，分别从上、中、下3个部位剪取完整的百合叶片。

D.病原菌采集：取百合典型感病叶片，分离纯化病原菌，经鉴定是灰霉菌后，在马铃薯燕麦淀粉培养基上培养7d，用于接种健康的百合叶片。

E. 接种方法：采用以下的菌丝块接种法，孢子液喷雾接种法或摩擦接种法来接种百合灰霉病原菌；

所述菌丝块接种法：用直径为0.5cm的打孔器将在马铃薯燕麦淀粉培养基上生长7d的灰霉菌打成菌丝块，将其接种于待测百合叶片；

所述孢子液喷雾接种法：用无菌水将在马铃薯燕麦淀粉培养基上生长7d的灰霉菌孢子洗出，并调成浓度为1×10⁵~5×10⁵ cfu/mL的菌悬液，喷雾接种于待测百合叶片；

所述摩擦接种法：挑取马铃薯燕麦淀粉培养基上生长7d的灰霉病原菌与适量石英砂及无菌水混合均匀，用无菌的小指形管沾取调制好的孢子叶，避开主叶脉涂抹于待测叶片上，摩擦数次至形成细小的伤口；

F.培养：接种好病原菌的百合叶片叶柄伤口处用湿润的棉花包裹，将接种好的百合叶片置于培养皿中，喷洒适量无菌水，于25℃条件下保湿培养。

G.观察鉴定：分别于3、5、7、9d调查叶片发病情况。

接种方法中，可根据所需选择不同的接种方法，其中，菌丝接种法接种的叶片感病症状最典型，易于观察，孢子液喷雾接种法操作最简便，摩擦接种法能使叶片最快感病。

本发明的积极效果是：建立了快速人工接种离体鉴定百合灰霉病抗性的方法，实现了在可控条件下准确高效地鉴定不同百合品种对百合灰霉病的抗性，对于抗源材料的筛选、抗病品种的选育和抗性品种的利用具有十分重要的意义。

下面将通过实例对发明作进一步详细说明，但下述的实例仅仅是本发明其中的例子而已，并不代表本发明所限定的权利保护范围，本发明的权利保护范围以权利要求书为准。

具体实施方式

实例1：

成功离体快速接种鉴定了百合品种‘新铁炮’对百合灰霉病的抗性，认定了百合品种‘新铁炮’对百合灰霉病表现为感病。

具体实施方法如下：