[发明专利]一种海洋青霉菌及其次级代谢产物Flufuran的发酵工艺

权利要求书

1.一种海洋青霉菌，该菌分类命名为Penicillium dipodomyicola，于2014年3月保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC M 2014087。

2.根据权利要求1所述的一种海洋青霉菌，其特征在于：该菌落在培养初期呈现淡黄色，随着培养时间延长，菌落颜色不断加深至褐色，分生孢子较松散的分布在菌体上，在培养后期可见孢子脱落。

3.一种海洋青霉菌次级代谢产物Flufuran的发酵工艺，其特征在于包括以下步骤：

（1）菌种活化

将保藏在-80℃冰箱中的保藏编号为CCTCC M 2014087的海洋青霉菌接种在马铃薯葡萄糖肉汤固体培养基上，在25 ℃培养箱中培养2 d后，挑取单菌落再次接种到马铃薯葡萄糖肉汤固体培养基上，再于25 ℃培养箱中培养2 d后备用；

（2）种子培养

将步骤（1）活化得到的海洋青霉菌接种于装液量为40%的马铃薯葡萄糖肉汤液体培养基中，在25 ℃、150 rpm的条件下培养1 d，得到种子液；

（3）发酵培养

取种子液按体积分数5%的接种量接种于装液量为40%的发酵培养基中，于25 ℃，150 rpm的条件下培养12d，得到发酵液；

（4）发酵液体处理

将步骤（3）得到的发酵液过滤取上清液，乙酸乙酯萃取3次，去除有机相后用甲醇复溶，得到进样液；

（5）Flufuran的制备

采用高速逆流色谱（HSCCC）法对进样液进行分离纯化，得到海洋青霉菌次级代谢产物Flufuran单体。

4.根据权利要求3所述的一种海洋青霉菌次级代谢产物Flufuran的发酵工艺，其特征在于步骤（5）具体为：

A.取正丁醇、醋酸和纯水按4：9：0.1的比例混合后作为HSCCC的两相体系；

B.将两相体系中以正丁醇为主的上相作为流动相，以醋酸和纯水为主的下相作为固定相，将流动相按10 mL/min的速度泵入高速逆流色谱仪直至高速逆流色谱仪转速达到900转/min后，将固定相按5 mL/min泵入高速逆流色谱仪直至流动相和固定相达到平衡后进样；

C.启动检测器开始监测，收集含Flufuran的出峰时间为70min到90min部分的洗脱液，减压浓缩后得到纯度达90%的海洋青霉菌次级代谢产物Flufuran单体。

5.根据权利要求3或4所述的一种海洋青霉菌次级代谢产物Flufuran的发酵工艺，其特征在于所述的发酵培养基的配制如下：将马铃薯浸出液10 g，可溶性淀粉20 g，溶于1 L海水中，其中海水由1 L纯水加入35 g海水晶配制而成。