[发明专利]高分子量的夏枯草多糖及其制备方法与在免疫药物中的应用

权利要求书

1.一种高分子量的夏枯草多糖的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

(1)将夏枯草果穗干燥后，粉碎，过筛，加入乙醇加热回流，脱色和除去小分子醇溶性物质，过滤处理得残留物，残留物重复加入乙醇加热回流2～3次，在45～60℃的鼓风干燥箱中干燥24～48h；

(2)将步骤(1)处理所得的夏枯草样品与蒸馏水配成固液比为1:15～1:35，置于超声场条件下，超声输出功率为100～300W，频率为15～50KHz，处理时间10～30min，温度25～40℃；然后将物料泵入高压场中，压力为100～500MPa，温度为100～130℃，时间10～30min，然后5～10s内减压到标准大气压，将物料泵回超声场中进行超声处理后，再进行高压处理，循环周期为3～5次；所述循环周期是指物料先超声处理再进行高压处理的一次循环过程；离心分离得提取液，离心力4500～10000g，时间5～10min，在45～65℃下减压浓缩到原体积的1/5～1/10，得多糖浓缩液；

(3)在多糖浓缩液中加入Sevag试剂，多糖浓缩液与Sevag试剂的体积比为3:1～6:1，振荡20～30min，离心分离糖液，离心力4500～10000g，离心时间5～10min，重复进行10～20次；

(4)将(3)中脱蛋白后的多糖浓缩液加入到大孔树脂，进行静态吸附，浓缩液与大孔树脂的体积比为5:1～2:1，温度35～50℃，时间4～6h，过滤得滤液；

(5)在(4)中滤液中加入无水乙醇，边搅拌边加入，使乙醇体积浓度达到65～85％，4～5℃冷藏室中静置12～24h，离心得沉淀的多糖，离心力4500～10000g，时间10～15min，冷冻干燥得夏枯草粗多糖；

(6)将夏枯草粗多糖溶于蒸馏水，配制浓度为20～30mg/mL的多糖溶液，上样于DEAE‐Sepharose柱，上样量体积与柱体积的比为1:3～1:5，用蒸馏水进行洗脱，流速0.5～2mL/min，分管收集，每管5～10mL，苯酚硫酸法检测多糖，将糖反应阳性收集液合并，45～65℃下减压浓缩，冷冻干燥得纯化的夏枯草多糖；所述阳性收集液为1/2最大吸光值范围的收集液。

2.根据权利要求1所述的一种高分子量的夏枯草多糖的制备方法，其特征在于，所述乙醇体积浓度为95％；所述过筛为过30～50目筛。

3.根据权利要求1所述的一种高分子量的夏枯草多糖的制备方法，其特征在于，所述步骤(3)中Sevag试剂为氯仿与正丁醇的混合液，其体积比为3:1～6:1。

4.根据权利要求1所述的一种高分子量的夏枯草多糖的制备方法，其特征在于，所述步骤(4)中大孔树脂为大孔树脂D101，聚酰胺树脂或大孔树脂D354FD。

5.根据权利要求1所述的一种高分子量的夏枯草多糖的制备方法，其特征在于，所述步骤(6)制备的多糖分子量范围为1000～4000K道尔顿。

6.根据权利要求1所述的一种高分子量的夏枯草多糖的制备方法，其特征在于，步骤(5)和(6)中所述冷冻干燥是在‐50±5℃，0.08～0.1MPa真空度下干燥干燥24～48h，干燥后的样品中水分的质量百分含量低于4％。

7.根据权利要求1所述的一种高分子量的夏枯草多糖的制备方法，其特征在于，所述加入乙醇加热回流为控制夏枯草粉与乙醇质量比为1:3～1:6，温度65～85℃，回流时间3～5h。

8.一种高分子量的夏枯草多糖，其特征在于其由权利要求1～7任一项所述制备方法制得。

9.根据权利要求8所述夏枯草多糖在制备提高免疫力的临床药物和保健品中的应用。