[发明专利]人抗凝血酶III的胶乳增强免疫比浊法检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及临床检验领域。具体而言，涉及一种利用胶乳增强免疫比浊方法测定样本中人抗凝血酶III含量的试剂盒。

背景技术

抗凝血酶(Antithrombin)简称AT，血浆源性AT简称为pAT。pAT是体内重要的天然抗凝蛋白，属于丝氨酸蛋白酶抑制物家族成员。其血浆浓度约为100至150μg/ml(2至3μmol/L)。pAT由肝脏及血管内皮细胞产生，是一种维生素K依赖的、由432个氨基酸组成的分子质量为58kDa的单链糖蛋白，含4个N糖基化寡糖链及3个二硫键。根据其135位的天门冬酰胺是否含糖基可分为含糖基的α异构体及无糖基的β异构体。由于α异构体135位的糖基可以阻止与肝素的结合，故其与肝素的亲和力小于β异构体。现还通过转基因绵羊获得了重组抗凝血酶，简称rAT。MasaakiHirose等在中国仓鼠卵巢细胞上表达了rAT，通过成批发酵使其产量达到1g/L。纯化的rAT具有pAT的特异活性，减少了糖基量，增强了与肝素的亲和力。

抗凝血酶III(AT-III)是作为血液中活性凝血因子的最重要的阻碍因子，它控制着血液的凝固和纤维蛋白的溶解。血液中抗凝血酶III的水平根据各种疾病、症状而变化。在弥散性血管内凝血(DIC)、肝疾患、肾病综合征等中降低。血液中的抗凝血酶III水平降低可能会导致肝素治疗效果无法呈现。因此，掌握抗凝血酶III的活性作为对于此类疾病的监测、病态分析、预后判定以及肝素治疗或使用抗凝血酶III浓缩制剂投药时的指标具有重要意义。

抗凝血酶III水平增高：可导致出血。可见于先天性凝血因子缺乏，如血友病；后天性凝血因子缺乏，如急性肝炎、肾移植、使用抗凝药物等。

抗凝血酶III水平减低：可导致血栓形成。可见于先天性抗凝血酶III缺乏和功能异常，如肺梗塞、深部静脉血栓等血栓性疾病；后天性减低，如DIC、慢性肝病、心肌梗塞等。

抗凝血酶III的检测方法较多，传统的包括免疫火箭电泳法、凝胶空斑法、发色底物法等。其中发色底物方法(参见公开号CN102690862A)是目前最常用的方法。但是该方法需要特殊仪器，且所需时间较长。由于抗凝血酶III在人体内减少时具有重要的临床意义，因此开发出一种高灵敏度的检测试剂十分有意义。

发明内容

根据本发明的一些具体实施方式，提供了一种人抗凝血酶III的胶乳增强免疫比浊法检测试剂盒，其包含第一试剂和第二试剂，其中：

第一试剂包含稳定剂、表面活性剂、防腐剂、电解质、促凝剂及缓冲液；

第二试剂包含稳定剂、表面活性剂、防腐剂、电解质、包被有抗人抗凝血酶III多克隆抗体的胶乳颗粒、及缓冲液。

在一些实施方案中，本发明的试剂盒还可以根据需要包括校准品。校准品用于标准曲线的绘制。因此，校准品可以自行配制、也可以使用任何市售校准品。在一些具体实施方式中，校准品包含防腐剂、电解质、稳定剂、人抗凝血酶III及缓冲液。在一些具体实施方式中，抗凝血酶III在校准品中的含量在0至1000ng/ml之间。在一些具体实施方式中，抗凝血酶III源自人的体液并且纯度≥95％；例如从人体体液中天然提取并纯化获得。

在一些具体实施方式中，校准品包含四个浓度水平的抗凝血酶III，其中一个浓度水平不含抗凝血酶III；其余校准品中分别添加有不同含量的抗凝血酶III。在一些具体实施方式中，校准品包含质量百分比0.1至1％的稳定剂、质量百分比0.01％至0.1％的防腐剂、质量百分比0.1至5.0％的电解质、10至100mmol/L的pH6.5至8.0的缓冲液、已知浓度的人抗凝血酶III以及人血清基质。人血清基质可以合法收集自医疗机构的健康人血清，经灭活之后去除肝炎、HIV病毒传播风险；也可以是市售人血清基质。

在一些实施方案中，抗人抗凝血酶III多克隆抗体源自哺乳动物的IgG抗体，优选羊IgG抗体、或兔IgG抗体。

在一些实施方案中，胶乳颗粒的直径范围为50至250nm、优选100至200nm、更优选150nm。在一些实施方案中，胶乳颗粒在试剂中的浓度为0.5至5mg/mL。