[发明专利]一种制备异种脱细胞基质的方法及其产品

权利要求书

1.一种制备异种脱细胞基质的方法，其特征在于：其具体包括如下步骤：

(1) 制备断层皮片

用取皮机将动物皮肤制成0.1-2.0mm厚的断层皮片，经洗涤，去脂，再用磷酸盐缓冲液（PBS液）洗涤；

(2) 分离表皮和真皮

将步骤(1)得到的断层皮片用0.1%-0.5%的胰蛋白酶-PBS液在4℃-20℃下，浸泡6-24h；

(3) 交联

将步骤(2)处理后的材料用含有N,N-二环己基碳化二亚胺、N-羟基丁二酰亚胺(NHS)和一水吗啉乙磺酸（MES）的乙醇水溶液浸泡3-12h；

(4) 脱细胞

将步骤(3)处理后的材料用1-2%的氢氧化钠溶液处理8-24h，然后用0.1%-0.5%的胰蛋白酶-PBS液在4℃-20℃处理20-36h，PBS冲洗，以0.2%-0.5% 十二烷基磺酸钠(SDS)对基质进行震荡洗涤，100-200转/分钟，温度20℃-30℃，每隔1小时更换SDS液，3-5h取出，PBS冲洗；

(5) 冷冻干燥

-100--60℃预冷冻3-5小时，在冷冻干燥机做8-15小时真空冷冻干燥；

(6) 病毒灭活

经Co-60所产生的射线辐照消毒灭菌，即得成品；

所述含有N,N-二环己基碳化二亚胺、N-羟基丁二酰亚胺(NHS)和一水吗啉乙磺酸（MES）的乙醇水溶液的配制方法如下：向乙醇水溶液,加入一水吗啉乙磺酸（MES）使其浓度达到0.06mol/L，再向上述溶液中加入N,N-二环己基碳化二亚胺（DCC）和N-羟基丁二酰亚胺(NHS),按质量比为每克步骤(2)处理后的材料对应1.8-5.4克N,N-二环己基碳化二亚胺和0.415-1.245克NHS。

2.根据权利要求1所述的一种制备异种脱细胞基质的方法，其特征在于：所述的PBS液的配制方法如下：

NaCl 8.00g/L；

KCl 0.20 g/L；

Na₂HPO₄ 1.56g/L；

KH₂PO₄ 0.20 g/L；

将上述各成分依次溶解于含有800ml水的容量瓶中，补加水至1000ml，混匀。

3.根据权利要求1所述的一种制备异种脱细胞基质的方法，其特征在于：所述步骤(2)中胰蛋白酶-PBS液的浓度为0.13%，温度为7℃。

4.根据权利要求1所述的一种制备异种脱细胞基质的方法，其特征在于：所述步骤(4)中，氢氧化钠溶液的浓度为1%，所述胰蛋白酶-PBS液的浓度为0.13%，温度为7℃。

5.一种异种脱细胞基质，其特征在于：所述异种脱细胞基质是采用权利要求1-4任一项所述的方法制得。