[发明专利]海豚链球菌快速检测引物及其方法有效
| 申请号： | 201410226035.7 | 申请日： | 2014-05-26 |
| 公开（公告）号： | CN103966342A | 公开（公告）日： | 2014-08-06 |
| 发明（设计）人： | 徐晓丽;姚学良;包海岩;李灏;丁子元 | 申请（专利权）人： | 天津市水产技术推广站 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;C12Q1/04;C12N15/11 |
| 代理公司： | 天津市北洋有限责任专利代理事务所 12201 | 代理人： | 陆艺 |
| 地址： | 300221 天津市*** | 国省代码： | 天津;12 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 海豚 链球菌 快速 检测 引物 及其 方法 | ||
1.一种海豚链球菌快速检测引物，其特征是由外引物和内引物组成，所述外引物由SEQ ID NO.1所示的外引物上游引物和SEQ ID NO.2所示的外引物下游引物组成；所述内引物由SEQ ID NO.3所示的内引物上游引物和SEQ ID NO.4所示的内引物下游引物组成。
2.一种海豚链球菌快速检测方法，其特征是包括如下步骤：
(1)提取待检样品DNA；
(2)在装有19μl LAMP反应基础液的200μl PCR反应管中加入4μl引物混合液，1μl Bst DNA聚合酶，1μl待检样品DNA模板，配成25μl的LAMP反应体系；于60-65℃放置40-60min，再于85℃放置15min得到检测液；
(3)采用质量浓度1％的琼脂糖电泳检测检测液是否产生连续的阶梯状的DNA条带，是则为阳性，或在检测液中加入1μl荧光染料SYBR Green I工作液，肉眼观察颜色反应，呈绿色为阳性，呈橙红色为阴性，阳性表示待检样品中含有海豚链球菌；阴性表示不含有海豚链球菌；
所述引物混合液是等体积的浓度为5μmol/L由SEQ ID NO.1所示的外引物上游引物，浓度为5μmol/L由SEQ ID NO.2所示的外引物下游引物，浓度为40μmol/L由SEQ ID NO.3所示的内引物上游引物和浓度为40μmol/L由SEQ ID NO.4所示的内引物下游引物组成。
3.根据权利要求2所述的一种海豚链球菌快速检测方法，其特征是所述待检样品为鱼血液、鱼脾、鱼肾组织或细菌。
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