[发明专利]一种细胞培养板及其制备方法和应用无效
| 申请号： | 201410226720.X | 申请日： | 2014-05-26 |
| 公开（公告）号： | CN103966096A | 公开（公告）日： | 2014-08-06 |
| 发明（设计）人： | 朱沛志;陈金帅;赵阳;李平 | 申请（专利权）人： | 扬州大学 |
| 主分类号： | C12M3/00 | 分类号： | C12M3/00;C12N5/0775;C08J7/12 |
| 代理公司： | 南京知识律师事务所 32207 | 代理人： | 卢亚丽 |
| 地址： | 225009 *** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 细胞培养 及其 制备 方法 应用 | ||
1.一种细胞培养板，其特征在于，在细胞培养板表面涂覆有一层羧基丁腈胶乳膜，所述膜上偶联有RGD多肽。
2.如权利要求1所述的细胞培养板，其特征在于按照以下方法制备得到：
(1)将聚苯乙烯培养板用无水乙醇、蒸馏水洗，真空干燥，备用；
(2)将羧基丁腈胶乳滴加到步骤(1)的培养板中，液面要完全覆盖培养板底部，然后将滴加过羧基丁腈胶乳的聚苯乙烯培养板放入60℃真空干燥箱中30分钟；
(3)用电子天平称取4.78～7.17克碳化二亚胺、3～4.604克羟基琥珀酰亚胺以及10～12.1875克2-吗啉乙磺酸水合物，用50ml蒸馏水将其溶解，放入4℃冰箱，备用；
(4)将(3)中所配的溶液滴加到步骤(2)的培养板中，液面要完全覆盖培养板底部，放入30℃烘箱2小时；
(5)将(4)中的培养板中的混合液体弃之，并将1～2g/L的RGD多肽溶液加入(4)中的细胞培养板中，每孔1～2mL，并放在摇床上反应24小时。
(6)24小时过后，将(5)中的细胞培养板中的液体弃置，并用PH＝7.35的磷酸缓冲溶液冲洗，冲洗后烘干，封存。
3.一种制备权利要求1所述细胞培养板的方法，其特征在于使用碳化二亚胺、羟基琥珀酰亚胺以及2-吗啉乙磺酸水合物偶联方法在培养板表面接枝引入多肽。
4.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于所述多肽的序列为RGDKKK。
5.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于包括以下步骤：
(1)将聚苯乙烯培养板用无水乙醇、蒸馏水洗，真空干燥，备用；
(2)将羧基丁腈胶乳滴加到步骤(1)的培养板中，液面要完全覆盖培养板底部，然后将滴加过羧基丁腈胶乳的聚苯乙烯培养板放入60℃真空干燥箱中30分钟；
(3)用电子天平称取4.78～7.17克碳化二亚胺、3～4.604克羟基琥珀酰亚胺以及10～12.1875克2-吗啉乙磺酸水合物，用50ml蒸馏水将其溶解，放入4℃冰箱，备用；
(4)将(3)中所配的溶液滴加到步骤(2)的培养板中，液面要完全覆盖培养板底部，放入30℃烘箱2小时；
(5)将(4)中的培养板中的混合液体弃之，并将1～2g/L的RGD多肽溶液加入(4)中的细胞培养板中，每孔1～2mL，并放在摇床上反应24小时。
(6)24小时过后，将(5)中的细胞培养板中的液体弃置，并用PH＝7.35的磷酸缓冲溶液冲洗，冲洗后烘干，封存。
6.权利要求1所述细胞培养板在培养骨髓间充质干细胞中的应用。
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