[发明专利]一种细胞培养板及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种细胞培养板及其制备方法和在细胞培养中的应用，属于细胞培养技术领域。

背景技术

骨髓间充质干细胞是一群具有多种分化潜能的多能干细胞，能最终分化成骨、软骨、肌肉、神经和脂肪等组织，具有以下特点：①来源较为广泛，易于培养，能在宿主体内外长期存活，且具有自我更新和增殖能力；②低免疫源性，易于外源基因转染和长期表达；③在适宜的环境中具有多项分化潜能等。近年来人们发现骨髓间充质干细胞还具有抑制同种异体免疫反应、减轻移植物抗宿主效应的作用，以上发现使得骨髓间充质干细胞在组织工程、器官移植及自身免疫性疾病领域有着广泛的应用前景。但骨髓间充质干细胞在体外增殖较慢，因此，如何实现少量取样批量体外培养增殖，是骨髓间充质干细胞应用研究的当务之急。

文献Villa-Diaz等报道称聚合物涂层PMEDSAH能够支持人胚胎干细胞在多种不同的培养基中长期生长。这种成分确定的培养基质对于阐明人胚胎干细胞行为的内在机制和最优化人胚胎干细胞生物医学应用条件有着重要意义(Luis G Villa-Diaz,Himabindu Nandivada,Jun Ding,et al.Synthetic polymer coatings for long-term growth of human embryonic stem cells.Nature biotechnology28(2010):581-583.)。Blin等采用不同交联度的聚赖氨酸/透明质酸纳米膜来调控鼠胚胎干细胞的纳米环境。结果发现，胚胎干细胞在天然膜上的粘附程度最低，能够较好地保持多功能性，随着交联度的增加，粘附程度增加(Guillaume Blin,Nassrine Lablack,Marianne Louis-Tisserand,et al.Nano-scale control of cellular environment to drive embryonic stem cells selfrenewal and fate.Biomaterials31(2010):1742–1750.)。Hernandez等为了简化人干细胞培养条件，采用CELLstart基质和成分确定的培养基在无饲养层的条件下实现了人胚胎干细胞的自我复制。实验中采用的两种人胚胎干细胞都能够在该条件下传代20多次，并且保持多功能性(Diana Hernandez,Ludmila Ruban,and Christopher Mason.Feeder-free culture of human embryonic stem cells for scalable expansion in a reproducible manner.Stem Cells and Development20(2011):1089-1099.)。Markert等设计了生物表面结构阵列(BSSA)用于培养鼠胚胎干细胞，该阵列包括504种不同的表面微结构。结果发现，存在一种特定的表面微结构使得干细胞能在无饲养层的条件下增殖(Lotte D’Andrea Markert,Jette Lovmand,Morten Foss,et al.Identification of distinct topographical surface microstructures favoring either undifferentiated expansion or differentiation of murine embryonic stem cells.Stem Cells and Development18(2009):1331-1343.)。这些现有技术存在制备成本高，特别是使用动物中提取的细胞外基质可能含有一些致病物质会损害细胞的生长和分化，因而无法大规模生产。

羧基丁腈胶乳(XNBRL)是作为是丁二烯、丙烯腈和丙烯酸或甲基丙烯酸的三元共聚物。与未引入羧基的丁腈胶乳相比，XNBRL具有突出的机械稳定性和冻解稳定性，其黏合性和与其他高分子的相容性也得到较大改善，它可以用金属氧化物进行硫化，所得胶乳薄膜的机械强度和耐油性均优于非羧化的丁腈胶乳。据大量文献表示羧基丁腈胶乳具备天然胶乳的一些性能，羧基丁腈胶乳由丁二烯和甲基丙烯酸乳液共聚制得的橡胶胶乳，在分子主链上含有亲水的强粘性集团羧基，可避免生霉，虫蛀，产品质量高且稳定，有较好的柔顺性、耐油性、耐化学性、耐刺穿性和耐磨性能，低可提物以及耐静电性能，粘接性能较好且价格便宜。