[发明专利]一种甲啶铂原料药及其注射液含量的分析检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及抗肿瘤药物及注射液分析检测方法，即通过高效液相色谱法检测分析甲啶铂及其注射剂中的杂质和有关物质。

背景技术

甲啶铂属于铂族金属配合物，是继顺铂、卡铂和奥沙利铂之后的新一代铂族金属抗肿瘤药物。甲啶铂(picoplatin)又名吡铂，代号NX473、JM473、AMD473、ZD0473，全称顺式-二氯-氨-(2-甲基吡啶)合铂(Ⅱ)，分子量为376.16。

甲啶铂结构式为：

甲啶铂中心原子Pt和两个N原子、两个Cl-原子位于同一平面上，形成平面正方形结构，而2-甲基吡啶中的甲基位于此平面轴向。这种结构使得甲啶铂与体内生物大分子的反应位阻效应增大，降低了药物与生物大分子的反应速率，一定程度上克服了细胞自身的解毒作用，提高了甲啶铂的抗癌活性，减轻了此药物的毒副作用，同时也克服了某些细胞的顺铂耐药性。

甲啶铂最早由英国JohnsonMatthey公司，加拿大AnorMed公司和英国癌症研究所共同开发，1997年开始进入临床试验研究阶段，主要用于二线治疗对现有铂类药物已有抵抗性的实体瘤，目前应用甲啶铂治疗小细胞肺癌的临床试验已经进入Ⅲ期，治疗前列腺癌和结肠直肠癌的临床试验已经进入到Ⅱ期。作为二线化疗药物，在临床治疗小细胞肺癌(SCLC)的Ⅱ期实验中，甲啶铂对获得顺铂耐药性或者复发型的SCLC患者，治疗效果达到预期指标，毒副作用主要表现为血液学毒性。但是在接下来的在一项名为“SPEAR”考查安全性和有效性的临床Ⅲ期实验中，与最好的支持治疗相比，患者的死亡率降低11％，没有达到统计学上的显著效果。在治疗晚期恶性固体瘤临床Ⅰ期试验中，甲啶铂联合聚乙二醇化脂质体阿霉素获得理想效果。在治疗转移性结直肠癌(mCRC)Ⅱ期试验中，甲啶铂表现出了可与奥沙利铂相比拟的临床效果，并且在一线联合化疗试验中联合5-FU和亚叶酸产生更少的毒副作用，治疗效果优于奥沙利铂。在治疗去势抵抗性前列腺癌(CRPC)Ⅱ期试验中，甲啶铂联合多系紫杉醇和强的松的研究获得了预期效果。目前，甲啶铂已获得中国国家食品药品监督管理局(SFDA)许可，将进行两部分Ⅲ期临床试验，即以甲啶铂治疗小细胞肺癌(SCLC)与作为卵巢癌的二线药物。口服给药也处于Ⅰ期临床试验中。

甲啶铂在纯化水中易发生水合反应而降解，反应过程如下：

一定浓度的Cl^-和一定的酸度有助于提高甲啶铂在水溶液中的稳定性，但是如果酸性太低，或者溶液呈碱性，以及氧化剂和还原剂会降低甲啶铂的稳定性。

由于甲啶铂易水解，测定甲啶铂及其注射剂含量时要注意同时分析检测其降解产物。传统方法由于检测限和定量限低限制了应用，专利CN102590385A能很好地将甲啶铂与其杂质分开，但是此方法并没有将合成甲啶铂的原料顺铂和三氯氨合铂酸钾列为杂质，也没有报道有关降解产物的检测分析。因此，需要建立一种灵敏度高，与杂质分辨率好，并且能够检测分析甲啶铂在溶液中降解产物的方法。

目前尚未发现有关甲啶铂高浓度注射剂的检测分析报道。

上述甲啶铂高浓度注射剂是指将甲啶铂溶于聚乙二醇400和盐酸氯化钠溶液的混合液中配制而成的最高可含甲啶铂15mg/ml的溶液，相关报道见专利CN101804025A。

发明内容

本发明涉及一种甲啶铂及其注射液含量的分析检测方法，此方法线性相关，理论塔板数、分辨率、拖尾因子、检测限和定量限等均能满足药物分析检测的要求，具有良好的精密度和回收率，检测灵敏，方便快速，适用于甲啶铂原料药及其注射剂的测定，以及杂质和有关物质的分析。

本发明所述的分析检测方法具体操作如下：

(1)采用高效液相色谱分析法，色谱条件为：采用C18为固定相，流动相为5％～30％乙腈水溶液，使用前预先混合并超声脱气，流动相流速为0.5ml/min～2.0ml/min，柱温20℃～45℃，检测波长为205nm～300nm。

(2)样品溶液的配制：采用纯化水或生理盐水将样品配制成含甲啶铂0.01mg/ml～1.0mg/ml的溶液或者采用生理盐水将甲啶铂注射液稀释为含甲啶铂0.01mg/ml～2.0mg/ml的溶液。

(3)将5μL～20μL样品溶液注入高效液相色谱仪，记录色谱图并进行分析。

上述分析检测方法所述乙腈水溶液为将色谱纯的乙腈溶液用纯化水或者蒸馏水配制而成，优选15％乙腈水溶液。

上述分析检测方法所述流动相流速为0.5ml/min～2.0ml/min，优选1.0ml/min。