[发明专利]用于特异性水产类过敏原IgE筛查的试纸条及其制备方法

权利要求书

1.一种用于特异性水产类食物过敏原IgE筛查的试纸条，其特征在于，所述试纸条包被有胶体金标记的水产类食物抗原。

2.根据权利要求1所述的试纸条，其特征在于，所述试纸条为包被有胶体金标记的水产类食物抗原的硝酸纤维素膜或醋酸纤维素膜。

3.根据权利要求1所述的试纸条，其特征在于，所述试纸条的pH值为8.5-10，胶体金颗粒与水产类食物抗原之间的摩尔比为20-40:1。

4.根据权利要求1-3任一项所述的试纸条，其特征在于，水产类的来源为海产品类和淡水类。

5.根据权利要求4所述的试纸条，其特征在于，所述海产品类包括但不限于带鱼、黄鱼、平鱼、墨斗鱼、海虾、海蟹、海贝；淡水类包括但不限于鲤鱼、鲫鱼、草鱼、鲢鱼、胖头鱼、河虾、河蟹。

6.根据权利要求5所述的试纸条，其特征在于，所述水产类食物抗原为带鱼抗原；所述带鱼抗原的制备方法为：取带鱼的肌肉组织，冷冻后用粉碎机进行粉碎，取100g粉碎后的鱼肉匀浆，分别用300mL丙酮分析纯溶液和300mL苯的分析纯溶液进行交替脱脂5-6次，离心后所得沉淀物置于通风橱中，将残余的丙酮和苯挥发完全，所得物质即为带鱼抗原。

7.权利要求1-6任一项所述试纸条的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)水产类食物抗原溶液的制备：将待标记的水产类食物抗原溶解在0.9％pH7.0的NaCl溶液中，使其终浓度为50-500μg/ml，即得水产类食物抗原溶液；

2)胶体金溶液的制备：用0.1M K₂CO₃溶液和0.1M HCl调0.01％HAuCl₄胶体金溶液的pH值至8.5-10，使胶体金的粒径达到40-60nm，浓度达到0.5-2％，即得胶体金溶液；

3)胶体金与水产类食物抗原的结合：用0.1M K₂CO₃溶液调步骤1)的抗原溶液的pH值至8.5-10，边搅拌边向其中加入步骤2)的胶体金溶液，抗原溶液与胶体金溶液的体积比为1-10:100，同时加入稳定剂以防止水产类食物抗原与胶体金颗粒聚合沉淀，即得胶体金-水产类食物抗原结合物；所述稳定剂为1％BSA和0.1％分子量20KD的聚乙二醇；

4)胶体金标记的水产类食物抗原的纯化：将步骤3)中制备的胶体金-水产类食物抗原结合物经1500r/min离心20min；收集沉淀溶于稳定剂中，使其浓度达到5-30％；然后加至Sephacryl S-400层析柱上进行纯化，将纯化的胶体金标记的水产类食物抗原溶液过滤除菌，4℃保存；所述稳定剂为1％BSA和0.1％分子量20KD的聚乙二醇溶液；

5)试纸条的包被：将步骤4)中制备的胶体金标记的水产类食物抗原溶液喷线于试纸条上，干燥后即得用于特异性水产类食物过敏原IgE筛查的试纸条成品。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，步骤4)中加样量为Sephacryl S-400层析柱体积的1/10，以稳定剂作为洗脱液，流速为5-10ml/h；所述稳定剂为1％BSA和0.1％分子量20KD的聚乙二醇溶液。