[发明专利]分子缀合物

说明书

本申请为申请号为200680043958.2的分案申请，要求2005年11月23日的优先权。

相关申请资料

本申请要求2005年11月23日提交的美国临时专利申请No.60/739,794的利益，该申请并入本文作为参考。

技术领域

本发明涉及分子缀合物，用于制备这些缀合物的连接剂，制备该缀合物和连接剂的方法，和使用该缀合物的方法。更具体地说，本发明涉及Fc-特异性抗体缀合物，用于制备Fc-特异性抗体缀合物的酰肼硫醇连接剂，制备Fc-特异性缀合物的方法，以及使用Fc-特异性抗体缀合物的方法。

背景技术

已经发展了各式各样用来将分子连接在一起形成缀合物的方法。特别重要的是生物分子缀合物，它们通常被制备成将参与分子的官能团结合成一个构筑物。一类生物分子缀合物将一个与另一种分子(例如核酸、抗体、凝集素或亲和素)特异结合的生物分子与一种可检测的标记物(例如荧光标记物、荧光纳米粒子或酶)结合。

抗体和可检测标记物的缀合物(抗体缀合物)可用于检测生物样品中特定的靶分子的免疫分析。这种缀合物的抗体部分与样品中的靶物特异结合，而可检测标记物则被用来提供指示该靶物的存在和/或定位的可测信号。一类已被广泛使用的，尤其是用于免疫组织化学分析的缀合物是抗体和酶的缀合物(抗体-酶缀合物)。通过向样品中加入底物产生可检测的信号，加入的条件应使抗体-酶缀合物的酶部分在抗体部分与其靶物的结合部位将底物转化成可检测的产物(例如有色的、不同颜色的或荧光产物)。

抗体缀合物通常利用偶联剂制备，偶联剂的特点是至少有两个活性基团，其中之一与抗体上的官能基反应，另一个与可检测的标记物上的官能基反应。但是，偶联会导致抗体和可检测标记物之一或二者失活。特别是，偶联可能通过空间位阻作用或者因为偶联剂与位于抗体和/或酶部分上的对其特异性和/或催化活性起关键作用的官能团反应，使抗体-酶缀合物失活。另外，一些偶联方案会导致缀合物的水溶性减小。

希望偶联方案能提供抗体特异性和/或酶活性受损较小的抗体-酶缀合物，并且能在免疫化学分析例如免疫组织化学分析中达到更高的灵敏度。高灵敏度对于不希望有额外的扩增步骤的自动化方法特别重要。

发明概要

公开了一种包含酰肼硫醇连接体的分子缀合物。在一项实施方案中，提供了一种抗体-可检测标记物缀合物，其中包含一个与该抗体的Fc部分共价键合的酰肼硫醇连接体。该实施方案的Fc-特异性缀合物具有改进的检测灵敏度，从而使靶分子的免疫组织化学检测更适合自动化和高流动量应用。

还公开了一种使用酰肼硫醇连接剂制备缀合物的方法。在一项实施方案中，该连接剂的一个硫醇基不需要保护基团，因为该连接剂是在硫醇基基本上以其中性酸的形式存在、从而基本上无反应活性的条件下与第一种分子反应。在这样的条件下，连接剂化合物的酰肼基团与第一种分子之间可以形成共价键，同时基本上保留了硫醇基团用于第二种分子的硫醇活性基团进行后继反应。

还公开了酰肼硫醇连接剂和制备酰肼硫醇连接剂的方法。此外，还描述了使用所公开的缀合物检测诸如组织切片或细胞学样品等样本中的靶分子的方法。由于所公开的缀合物显示出提高的灵敏度，检测靶分子的方法容易实现自动化。在某些实施方案中，提供了使用所公开的缀合物的多重分析法，例如，使用所公开的具有荧光分子或荧光纳米粒子作为检测标记物的抗体缀合物的多重分析。

附图简述

图1是显示使用所公开的Fc-特异性抗体-碱性磷酸酶缀合物和使用链霉亲和素-碱性磷酸酶缀合物检测扁桃体组织内的κ链的染色图案的一系列图像。

图2是显示使用所公开的Fc-特异性抗体-碱性磷酸酶缀合物和使用链霉亲和素-碱性磷酸酶缀合物检测扁桃体组织内λ链的染色图案的一系列图像。

图3是显示使用所公开的Fc-特异性抗体-碱性磷酸酶缀合物和使用链霉亲和素-碱性磷酸酶缀合物检测肺组织内CMV的染色图案的一系列图像。

图4是显示使用所公开的Fc-特异性抗体-碱性磷酸酶缀合物和使用链霉亲和素-碱性磷酸酶缀合物检测脾组织内EBER的染色图案的一系列图像。

图5是显示使用所公开的Fc-特异性抗体-碱性磷酸酶缀合物和使用链霉亲和素-碱性磷酸酶缀合物检测CaSki异种移植组织内HPV(人乳头瘤病毒)的染色图案的一系列图像。