[发明专利]来自丁酸梭菌的脂磷壁酸及其调节畜禽免疫应答的用途

权利要求书

1.一种来自丁酸梭菌的脂磷壁酸，其特征在于：该脂磷壁酸为由如下制备步骤制备而成的脂磷壁酸：

(1)向40-60mmol/L、pH6-7的Tris-HCl缓冲液中加TritonX-114，配制成质量百分比为1.5-2.5％的TX-114溶液，置于4℃冰箱保存，备用；

(2)取8-16mL经45-50h培养的丁酸梭菌液于若干支质量已知的塑料离心管中，常温、4500-5000rpm离心25-40min，除去上层培养液后再称各管质量，计算得到菌体湿重；

(3)按照步骤(2)制得的每1g湿菌添加8-12mL步骤(1)的1.5-2.5％％TX-114溶液的比例混合，磁力搅拌器搅拌裂解菌体25-40min，4℃静置过夜；然后4℃、4500-5000rpm离心25-40min，去除细菌碎片，收集上层提取物；提取物置于45-50℃水浴中25-30min，然后常温4500-5000rpm离心25-40min，收集上层水相，即为脂磷壁酸的粗提取物；

(4)先用0.1mol/LpH4.7的醋酸铵缓冲液预平衡DEAE-纤维素层析柱，然后向脂磷壁酸粗提取物中加入5倍其体积的0.1MpH4.7的醋酸铵缓冲液，稀释后过柱；用同一缓冲液洗脱，直到洗脱液275nm吸光度A275低于0.01，然后用1.0mol/LpH4.7醋酸铵缓冲液洗脱结合于柱上的脂磷壁酸，整个过程用试管收集洗脱液，A275监测脂磷壁酸洗脱峰；得到脂磷壁酸。

2.根据权利要求1所述的来自丁酸梭菌的脂磷壁酸，其特征在于：该脂磷壁酸与其他革兰氏阳性菌的细胞壁脂磷壁酸结构存在差异，该脂磷壁酸不会引起肠粘膜上皮细胞释放炎症因子，所述的炎症因子为IL-2和TNF-α。

3.根据权利要求1所述的来自丁酸梭菌的脂磷壁酸，其特征在于：步骤(1)的Tris-HCL缓冲液为50mmol/L、pH6.5，TX-114溶液质量百分比浓度为2％。

4.根据权利要求1所述的来自丁酸梭菌的脂磷壁酸，其特征在于：步骤(3)中每1g湿菌添加10mL的2％TX-114溶液。

5.根据权利要求1所述的来自丁酸梭菌的脂磷壁酸，其特征在于：步骤(2)的丁酸梭菌液培养条件为：37℃厌氧培养，其培养基为MRS培养基，MRS培养基配方：酪蛋白胨10g、牛肉浸膏10g、酵母粉5g、葡萄糖20g、乙酸钠5g、吐温-801g、磷酸氢二钾2g、七水硫酸锰0.2g、七水硫酸锰0.05g、碳酸钙20g、蒸馏水1000mL，pH7.0。

6.一种权利要求1所述的来自丁酸梭菌的脂磷壁酸在畜禽养殖中的应用，该脂磷壁酸在畜禽饲料中的添加量以丁酸梭菌的量计，为108cfu/g-1010cfu/g。

7.一种权利要求1所述的来自丁酸梭菌的脂磷壁酸在在调节畜禽免疫应答中的应用，所述的免疫应答由致病性革兰氏阳性菌和阴性菌或它们的衍生物所诱导。