[发明专利]一种枯草芽孢杆菌生产抗菌肽的发酵工艺

权利要求书

1.一种枯草芽孢杆菌生产抗菌肽的发酵工艺，其特征在于：所述发酵工艺包括如下依次进行的步骤：菌株活化、种子罐培养和发酵罐发酵。

2.如权利要求1所述的一种枯草芽孢杆菌生产抗菌肽的发酵工艺，其特征在于：所述种子罐培养包括一级种子罐培养；

所述一级种子罐培养包括以下步骤：将YPD培养基装入摇瓶中，灭菌，然后接入菌株活化步骤中得到的活化后的枯草芽孢杆菌单菌落，于35～37℃恒温振荡培养16～20 h，转速为160～200 rpm，得到摇瓶发酵液。

3.如权利要求2所述的一种枯草芽孢杆菌生产抗菌肽的发酵工艺，其特征在于：所述种子罐培养还包括二级种子罐培养；

所述二级种子罐培养包括以下步骤：在发酵罐中装入发酵培养基，发酵培养基的加入量占发酵罐总体积的50%，发酵罐灭菌冷却后，将一级种子罐培养步骤中得到的摇瓶发酵液按照发酵培养基体积的0.5%～1.5%进行接种，得到枯草芽孢杆菌菌液。

4.如权利要求3所述的一种枯草芽孢杆菌生产抗菌肽的发酵工艺，其特征在于：所述二级种子罐培养步骤中接种的发酵控制条件为：温度为35～37℃，转速为300～400 rpm，时间为16～20 h，接种前起始pH值为7.8，通风量为1:0.5。

5.如权利要求1-4其中之一所述的一种枯草芽孢杆菌生产抗菌肽的发酵工艺，其特征在于：所述发酵罐发酵包括以下步骤：将种子罐培养步骤中得到的枯草芽孢杆菌菌液以3%～8%的体积比接种于发酵罐中，在35～37℃、120～180 rpm条件下持续24～48 h，接种前起始pH值为7.8，通风量为1:0.6，末期升温10～15℃，维持2 h。

6.如权利要求1所述的一种枯草芽孢杆菌生产抗菌肽的发酵工艺，其特征在于：所述菌株活化采用三次YPD平板划线法；

第一次YPD平板划线包括以下步骤：取枯草芽孢杆菌冻干粉加入YPD培养基中，待完全溶解后在YPD平板上进行第一次划线，整个过程保持无菌，划线后的YPD平板置于37℃温箱中培养24 h；

第二次YPD平板划线包括以下步骤：第一次YPD平板划线培养后挑取单菌落在另一YPD平板上进行第二次划线，整个过程保持无菌，划线后的YPD平板置于37℃温箱中培养24 h；

第三次YPD平板划线包括以下步骤：第二次YPD平板划线培养后挑取单菌落在另一YPD平板上进行第三次划线，整个过程保持无菌，划线后的YPD平板置于37℃温箱中培养24 h。

7.如权利要求2或6所述的一种枯草芽孢杆菌生产抗菌肽的发酵工艺，其特征在于：所述YPD培养基，其有效成分包括：酵母膏、蛋白胨和葡萄糖；

所述YPD培养基采用以下步骤制备：

（1）取酵母膏10份和蛋白胨20份溶于900份纯化水中，121℃灭菌20min；

（2）取葡萄糖20份溶于100份纯化水中，经0.22μm滤器过滤除菌后混入步骤（1）所得的溶液中，得到YPD培养基。

8.如权利要求2或6所述的一种枯草芽孢杆菌生产抗菌肽的发酵工艺，其特征在于：所述YPD培养基，其有效成分包括：麦麸汁、玉米粉、酵母膏和葡萄糖；

所述YPD培养基采用以下步骤制备：

（1）取麦麸汁10g和玉米粉10g加入纯化水300mL，煮沸后糊化1～2 h，补足挥发的水分；

（2）取酵母膏10g溶于600mL纯化水中，121℃灭菌20min；

（3）取葡萄糖20g溶于100mL纯化水中，经0.22μm滤器过滤除菌；

（4）将步骤（1）、步骤（2）和步骤（3）中所得的溶液混合均匀，得到YPD培养基。

9.如权利要求3所述的一种枯草芽孢杆菌生产抗菌肽的发酵工艺，其特征在于：所述发酵培养基，其有效成分包括：葡萄糖、蛋白胨、磷酸氢二钾、氯化钠、无水氯化钙和硫酸锰；

所述发酵培养基采用以下步骤制备：取葡萄糖1.6份、蛋白胨1.45份、磷酸氢二钾0.2份、氯化钠0.08份、无水氯化钙0.05份和硫酸锰0.002份，加入纯化水至100份，将pH值调节至7.2～7.4，115℃灭菌30 min。

10.如权利要求3所述的一种枯草芽孢杆菌生产抗菌肽的发酵工艺，其特征在于：所述发酵培养基，其有效成分包括：葡萄糖、土豆汁、干酪素、维生素B₁、硫酸锰和脯氨酸；

所述发酵培养基的制备包括以下步骤：取葡萄糖1.6g、土豆汁1.58g、干酪素0.34g、维生素B₁ 0.001g、硫酸锰0.002g和脯氨酸0.2g，加入纯化水至100mL，将pH值调节至7.2～7.4，115℃灭菌30min。