[发明专利]一种检测阪崎克罗诺杆菌的方法及其试剂盒和引物有效
| 申请号： | 201410235609.7 | 申请日： | 2014-05-29 |
| 公开（公告）号： | CN103966353A | 公开（公告）日： | 2014-08-06 |
| 发明（设计）人： | 陈万义;任婧;杭锋;穆海菠;艾连中;郭本恒 | 申请（专利权）人： | 光明乳业股份有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;C12Q1/04;C12N15/11 |
| 代理公司： | 上海弼兴律师事务所 31283 | 代理人： | 朱水平;沈利 |
| 地址： | 201103 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 检测 阪崎克罗诺 杆菌 方法 及其 试剂盒 引物 | ||
1.一种非疾病的诊断或治疗目的的检测阪崎克罗诺杆菌(Cronobacter sakazakii)的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)提取待测样品的基因组DNA；
(2)以步骤(1)所得的基因组DNA为模板，以序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示的引物对进行PCR反应；和
(3)检测步骤(2)所得反应产物中498bp单一扩增产物的存在。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述PCR反应的反应体系包括：1×PCR反应缓冲液，10-15mmol/L Mg2+，0.2-0.3mmol/L dNTP，0.1-0.3μmol/L的序列分别如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示的引物，Taq酶0.05-0.1U/μL，和DNA模板10-100ng/μL；所述PCR反应的反应程序为：①94～95℃，3～5min；②94～95℃，30～40s；③60～62℃，30～40s；④68～72℃，30～40s；步骤②至④共30～35个循环；⑤68～72℃，7～10min；⑥4～15℃保存。
3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述PCR反应的反应体系包括：1×PCR反应缓冲液，12.5mmol/L Mg2+，0.25mmol/L dNTP，0.2μmol/L的序列分别如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示的引物，Taq酶0.04U/μL，和DNA模板40ng/μL；所述PCR反应的反应程序为：①94℃，5min；②94℃，30s；③60℃，30s；④72℃，30s；步骤②至④共35个循环；⑤72℃，10min；⑥12℃保存。
4.一种检测阪崎克罗诺杆菌(Cronobacter sakazakii)的引物对，其特征在于，其由序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示的引物组成。
5.一种检测阪崎克罗诺杆菌(Cronobacter sakazakii)的试剂盒，其特征在于，其包括如权利要求4所述的引物对。
6.如权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒还包括PCR缓冲液，Taq酶，dNTP溶液和Mg2+中的一种或多种。
7.如权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒还包括基因抽提试剂和/或阳性基因组DNA。
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