[发明专利]一种将外源基因导入闭颖授粉籼稻品种的遗传转化方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术和植物基因工程技术领域，具体而言，本发明涉及一种将外源基因导入到闭颖授粉的籼稻品种，尤其是9m90的遗传转化方法

背景技术

水稻(Oryza sativa L.)是我国乃至世界上最重要的粮食作物，世界上60％以上的人口以稻米为主食。近年来面对日益频繁的干旱、极端温度等非生物胁迫的影响，人口增长和生态环境的压力，现代生物技术手段，特别是转基因技术在作物遗传改良方面的重要性日渐凸显。转基因技术为农作物的产量提升、品质改良和抗性增强提供了新路径、开拓了新空间。

但随着转基因作物的种植范围迅速扩大，转基因作物及其产品的安全性，引起了广泛关注。例如转基因品种花粉外传会带来基因漂移，可能产生“超级杂草”等风险，但目前缺乏实用有效的技术手段加以克服，比如物理隔离需要一定的空间阻止花粉传播(水稻需在100m以上)，只适于小面积实验，在大面积生产中是不切实际的。

而闭颖授粉品种在整个授粉过程中，颖花不张开，花药不外露，花粉不会向外传播，可以有效抑制花粉外传，避免基因污染。通过闭颖受体来解决基因污染问题，是目前被认为最可行的技术手段，但目前生产还缺乏实用化的闭颖水稻品种。本实验室创制的9m90等闭颖授粉籼稻品种，不仅完全闭颖授粉，而且结实率、株高等重要农艺性状较好，可作为理想的转基因受体应用于品种快速遗传改良，减少生态风险。

但目前还没有闭颖授粉水稻品种的遗传转化方法的报道。为充分利用具有闭颖授粉性状的独特遗传资源，本发明旨在建立一种适用于闭颖授粉籼稻品种的遗传转化方法。

发明内容

本发明的目的是提供一种将外源基因导入到闭颖授粉的籼稻品种9m90的遗传转化方法、利用该方法生产转基因水稻的方法。本发明提供了下列技术方案来实现该目的。

在一个方面，本发明提供一种将外源基因导入闭颖授粉籼稻品种的遗传转化方法，其特征在于，所述方法包括下述步骤：

步骤1、提取水稻种子的胚，将所述胚置于愈伤组织诱导培养基上以产生次级愈伤组织；

步骤2、将所述次级愈伤组织转移至新的愈伤组织诱导培养基进行预培养；

步骤3、对所获得的愈伤组织进行农杆菌侵染；

步骤4、对所述愈伤组织进行前筛选；

步骤5、将经前筛选的愈伤组织转移至筛选培养基上，以获得抗性愈伤组织

步骤6、对所述抗性愈伤组织进行分化再生，以分化成苗；

步骤7、将所获得的苗转移到生根培养基中生根。

优选地，所述水稻种子为闭颖授粉籼稻品种9m90的种子。

优选地，所述步骤1包括将所述水稻种子去壳、灭菌后将胚分离出来，所述愈伤组织诱导培养基中[NO₃^-]/[NH₄⁺]＝20mM/20mM，并且含有30μM氯化钴。

优选地，所述步骤3包括：将所述步骤2中获得的愈伤组织与携带外源基因的农杆菌接触15分钟，然后将所获得的愈伤组织转移到上垫有无菌滤纸的培养皿中在21-23℃培养48小时；

所述步骤4包括将愈伤组织置于前筛选培养基上培养5-7天；

所述步骤6包括将所述抗性愈伤组织转移到分化再生培养基中分化成苗。

优选地，所述无菌滤纸中加入2.5-3.5mL农杆菌悬浮培养基，所述农杆菌悬浮培养基中[NO₃^-]/[NH₄⁺]＝20mM/20mM；

所述愈伤组织转移筛选培养基中[NO₃^-]/[NH₄⁺]＝20mM/20mM，并且含有30μM氯化钴；

所述分化再生培养基中[NO₃^-]/[NH₄⁺]＝20mM/20mM，并且含有30μM氯化钴、1mg/L激动素(KT)和1mg/L萘乙酸(NAA)；并且

所述生根培养基中含0.4mg/L的NAA。

优选地，所述步骤1中的种子是成熟种子；和/或