[发明专利]一种厌氧真菌乙酰酯酶活性的快速检测方法无效
| 申请号： | 201410238895.2 | 申请日： | 2014-05-25 |
| 公开（公告）号： | CN104017857A | 公开（公告）日： | 2014-09-03 |
| 发明（设计）人： | 曹阳春;姚军虎;王腊梅;李宗军;孙菲菲;魏筱诗;曹志昂;王卫涛;徐秀容 | 申请（专利权）人： | 西北农林科技大学 |
| 主分类号： | C12Q1/44 | 分类号： | C12Q1/44 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 712100*** | 国省代码： | 陕西;61 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 真菌 乙酰 活性 快速 检测 方法 | ||
1.一种厌氧真菌乙酰酯酶活性的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
将待测液在1000×g离心10min，取上清液测定乙酰酯酶活性，将适当稀释的上清液、2mM p-硝基苯乙酯和50mM甘氨酸-氢氧化钠缓冲溶液置于50℃预热15-30min，然后向50μL适当稀释的上清液中加入100μL甘氨酸-氢氧化钠缓冲溶液和50μL p-硝基苯乙酯溶液于干燥洁净的96孔酶标板上，50℃反应15-30min后，用全自动酶标仪在410-420nm下检测吸光值，根据p-硝基苯的标准曲线计算乙酰酯酶活性。
2.根据权利要求1所述的厌氧真菌乙酰酯酶活性的检测方法，其特征在于，所述预热时间为15min。
3.根据权利要求1所述的厌氧真菌乙酰酯酶活性的检测方法，其特征在于，所述反应时间为30min。
4.根据权利要求1所述的厌氧真菌乙酰酯酶活性的检测方法，其特征在于，所述全自动酶标仪检测波长为415nm。
5.根据权利要求1所述的厌氧真菌乙酰酯酶活性的检测方法，其特征在于，所述缓冲液为pH9.0的甘氨酸-氢氧化钠缓冲液。
6.根据权利要求5所述的厌氧真菌乙酰酯酶活性的检测方法，其特征在于，所述冲液配制方法为：称取0.7505g甘氨酸，用去离子水充分溶解，并定容至50mL，称取0.4g氢氧化钠，用去离子水充分溶解，并定容至50mL，用去离子水稀释至50mM，甘氨酸和氢氧化钠按照17∶3的比例配制使用。
7.根据权利要求1所述的厌氧真菌乙酰酯酶活性的检测方法，其特征在于，所述2mM p-硝基苯乙酯溶液的配制方法为：准确称取0.3623g p-硝基苯乙酯标准品溶于800mL去离子水中，然后定容至1L。
8.根据权利要求1所述的厌氧真菌乙酰酯酶活性的检测方法，其特征在于，乙酰酯酶的1个酶活力单位(U)被定义为在上述酶促反应条件下，1mL检测液在1min内自标准底物p-硝基苯乙酯中释放1μM p-硝基苯所需的酶量。
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