[发明专利]一种白秃马勃菌丝体中水溶性活性多糖的制备方法

权利要求书

1.一种白秃马勃菌丝体的培养方法，其特征在于包括如下步骤：

（1）将白秃马勃菌接种于PDA固体斜面培养基，于26℃恒温培养5～7天，得到斜面种子；所述的PDA固体斜面培养基包含如下质量百分含量组分：马铃薯18～22%，葡萄糖1.0～3.0%，酵母粉1.0～2.0%，蛋白胨0.5～0.7%，七水硫酸锌0.01～0.03%，七水硫酸镁0.04～0.07%，磷酸二氢钾0.05～0.15%，琼脂粉1.0～2.0%，余量为水；

（2）取上述斜面种子接种到装有一级液体种子培养基的三角瓶中，加入玻璃珠，于26℃、130r/min培养72～96小时；所述的一级液体种子培养基包含如下质量百分含量组分：玉米粉3.0～5.0%，葡萄糖1.0～2.0%，黄豆粉1.0～2.5%，蛋白胨1.5～3.0%，酵母粉1.5～2.5%，七水硫酸镁1.0～2.5%，七水硫酸锌0.1～0.3%，磷酸二氢钾1.5～2.5%，余量为水；

（3）将培养72～96小时后的一级液体种子接种到装有二级液体种子培养基的三角瓶中，加入玻璃珠，于26℃、150r/min培养60～72小时；所述的二级液体种子培养基与一级液体种子培养基相同；

（4）将培养60～72小时后的二级液体种子接种到装有发酵培养基A的三角瓶中，于28℃、180r/min培养96小时；所述的发酵培养基A包含如下质量百分含量组分：马铃薯20～30%，蔗糖2.0～4.0%，蛋白胨0.6～1.2%，七水硫酸镁0.2～0.6%，磷酸二氢钾0.3～0.6%，碳酸钙0.2～0.6%，余量为水；

（5）将菌丝体与发酵液分离，用水冲洗干净，烘干后得到白秃马勃菌丝体。

2.根据权利要求1所述的白秃马勃菌丝体的培养方法，其特征在于：步骤（2）为取斜面种子3～5环接种到装有100mL一级液体种子培养基的250mL三角瓶中，加10～15颗玻璃珠，于26℃、130r/min培养72～96小时。

3.根据权利要求1所述的白秃马勃菌丝体的培养方法，其特征在于：步骤（3）为将一级液体种子按10%的接种量接种到装有100mL二级液体种子培养基的250mL三角瓶中，加10～15颗玻璃珠，于26℃、150r/min培养60～72小时。

4.根据权利要求1所述的白秃马勃菌丝体的培养方法，其特征在于：步骤（4）为将二级液体种子按6%的接种量接种到装有100mL发酵培养基A的250mL三角瓶中，于28℃、180r/min培养96小时。

5.根据权利要求1所述的白秃马勃菌丝体的培养方法，其特征在于：步骤（4）为将培养60～72小时后的二级液体种子接种到装有发酵培养基B的10L发酵罐中，发酵罐装料系数为0.7，罐压为0.04～0.07MPa，于28℃、220r/min培养72小时后放罐；所述的发酵培养基B包含如下质量百分含量组分：玉米粉4.0～6.0%，糖蜜1.0～3.0%，黄豆粉1.5～3.0%，花生油1.0～2.0%，酵母粉1.5～3.0%，七水硫酸锌1.0～2.0%，七水硫酸镁1.5～3.0%，磷酸二氢钾2.0～3.0%，余量为水。

6.根据权利要求1所述的白秃马勃菌丝体的培养方法，其特征在于：步骤（5）中所述的烘干为50℃烘干。

7.一种白秃马勃菌丝体中水溶性活性多糖的提取方法，其特征在于：包括如下步骤：

（1）将通过权利要求1～6任一项所述的方法得到的白秃马勃菌丝体研磨粉碎，加入去离子水进行浸提或超声，浓缩液体，加入乙醇沉淀收集白秃马勃菌水溶性活性多糖粗沉淀物；

（2）将白秃马勃菌水溶性活性多糖粗沉淀物用热水溶解，再用Sevag法反复除去游离蛋白质，直至检测不到蛋白质，浓缩，再用乙醇沉淀，得到去蛋白质后的白秃马勃菌水溶性活性多糖沉淀物；

（3）将去蛋白质后的白秃马勃菌水溶性活性多糖沉淀物经透析方法分离，除去小分子杂质，得到多糖分子量在3500～8000道尔顿之间的白秃马勃菌水溶性活性多糖精制提取液，加入乙醇沉淀，得到精制沉淀物；

（4）将精制沉淀物干燥得到白秃马勃菌水溶性活性多糖精制提取物。

8.根据权利要求7所述的白秃马勃菌丝体中水溶性活性多糖的提取方法，其特征在于：步骤（2）中所述的干燥为加热恒温干燥。