[发明专利]一种白秃马勃菌丝体中水溶性活性多糖的制备方法

说明书

 

技术领域

    本发明属于生物工程与技术领域，更具体涉及一种白秃马勃菌丝体中水溶性活性多糖的制备方法。

背景技术

白秃马勃中文别名白马勃，是担子菌纲、灰包目、灰包科、马勃属的药用真菌，是我国著名的药用真菌之一，主要分布于我国河北、山西、辽宁、黑龙江、陕西、甘肃、新疆等地区。子实体小，扁球形，近球形，梨形，浅棕灰色，并有发达的根状的菌丝索。外包被薄，粉状，有斑纹，内包被坚实而脆。孢子体蜜黄色到浅茶色，孢子球形，浅青黄色，直径4～5μm。光滑或有极细的小疣，常残留有小柄。孢丝同色，稀有的横隔，粗细均匀，4.5～6μm。幼时可食用，老后药用。白马勃含有赖氨酸、蛋氨酸等人体必需的八种氨基酸以及马勃素、麦角甾醇、类脂、抗败血酸、脱氢抗败血酸和白马勃多糖等，其活性成分具收敛性消炎止血，散热解毒利咽喉，抗肿瘤，提高人体免疫力等功效。由于其优良的食疗保健作用，国际市场对该菌的需求不断增加。马勃多糖主要通过大秃马勃、黄硬皮马勃、褐皮马勃、黄硬皮马勃、梨形马勃等子实体中提取或通过液体深层发酵培养制备胞外多糖。但白马勃的传统生产方法是固体栽培，这种方法周期长、占地面积大，又受季节和原料的限制，使得其子实体活性多糖物质产量低，难以推广，从而使其不能得到充分的利用。从白秃马勃菌丝体中提取水溶性活性多糖目前仍不见文献报道，其它马勃多糖提取则以子实体为材料，经热水浸提，用Sevag法脱蛋白，乙醇沉淀制备多糖，这些方法存在着提取效率低、用时长等问题。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的缺点与不足，提供一种白秃马勃菌丝体的培养方法。本发明的目的还在于提供一种白秃马勃菌丝体中水溶性活性多糖的提取方法。

本发明的目的通过下述技术方案实现：

一种白秃马勃菌丝体的培养方法，包括如下步骤：

（1）将白秃马勃菌接种于PDA固体斜面培养基，于26℃恒温培养5～7天，得到斜面种子。所述的PDA固体斜面培养基包含如下质量百分含量组分：马铃薯18～22%，葡萄糖1.0～3.0%，酵母粉1.0～2.0%，蛋白胨0.5～0.7%，七水硫酸锌0.01～0.03%，七水硫酸镁0.04～0.07%，磷酸二氢钾0.05～0.15%，琼脂粉1.0～2.0%，余量为水。

（2）取上述斜面种子接种到装有一级液体种子培养基的三角瓶中，加入玻璃珠，于26℃、130r/min培养72～96小时。所述的一级液体种子培养基包含如下质量百分含量组分：玉米粉3.0～5.0%，葡萄糖1.0～2.0%，黄豆粉1.0～2.5%，蛋白胨1.5～3.0%，酵母粉1.5～2.5%，七水硫酸镁1.0～2.5%，七水硫酸锌0.1～0.3%，磷酸二氢钾1.5～2.5%，余量为水。

（3）将培养72～96小时后的一级液体种子接种到装有二级液体种子培养基的三角瓶中，加入玻璃珠，于26℃、150r/min培养60～72小时。所述的二级液体种子培养基与一级液体种子培养基相同。

（4）将培养60～72小时后的二级液体种子接种到装有发酵培养基A的三角瓶中，于28℃、180r/min培养96小时。所述的发酵培养基A包含如下质量百分含量组分：马铃薯20～30%，蔗糖2.0～4.0%，蛋白胨0.6～1.2%，七水硫酸镁0.2～0.6%，磷酸二氢钾0.3～0.6%，碳酸钙0.2～0.6%，余量为水。

（5）将菌丝体与发酵液分离，用水冲洗干净，烘干后得到白秃马勃菌丝体。

步骤（2）优选为取斜面种子3～5环接种到装有100mL一级液体种子培养基的250mL三角瓶中，加10～15颗玻璃珠，于26℃、130r/min培养72～96小时。

步骤（3）优选为将一级液体种子按10%（V/V）的接种量接种到装有100mL二级液体种子培养基的250mL三角瓶中，加10～15颗玻璃珠，于26℃、150r/min培养60～72小时。

步骤（4）优选为将二级液体种子按6%（V/V）的接种量接种到装有100mL发酵培养基A的250mL三角瓶中，于28℃、180r/min培养96小时。