[发明专利]栖土曲霉蛋白酶在制备伤口清创、促进伤口愈合的药物中的应用

权利要求书

1.一种栖土曲霉蛋白酶在制备伤口清创、促进伤口愈合的药物中的应用。

2.根据权利要求1所述的栖土曲霉蛋白酶在制备伤口清创、促进伤口愈合的药物中的应用，其特征是：所述伤口为烧伤伤口、压疮伤口、慢性感染伤口或糖尿病足伤口。

3. 根据权利要求1或2所述的栖土曲霉蛋白酶在制备伤口清创、促进伤口愈合的药物中的应用，其特征是：所述栖土曲霉蛋白酶由下列步骤制得：

（1）培养基的制备

发酵培养基配比为：麸皮3%、米糠1%、玉米粉1%、KH₂PO₄ 0.4%，加水至100%，并于120℃下高温灭菌30分钟；

（2）粗酶液的制备液

将栖土曲霉3.942菌种按培养基8%的重量接种后，在250r/min振荡器中30℃下培养72小时；终止培养后，将发酵培养物于离心机中3000 r/min离心10分钟，取上清液即为粗酶液；

（3）栖土曲霉蛋白酶的分离

粗酶液过滤，滤液调节pH至7.0，加入20％浓度的单宁酸，边加边搅拌；单宁酸用量为粗酶液重量的1％；待沉淀完全后离心，收集沉淀；沉淀用pH 7.2、0.02M磷酸缓冲液溶解；使用聚乙二醇洗脱单宁酸，在搅拌下加入10％浓度的PEG，使PEG与单宁酸之比值达到3:1ml/g；离心，收集上清液，加人2倍重量的冷丙酮，静置过夜，离心，收集沉淀；沉淀再浸泡于冷丙酮，静置过夜，然后过滤，沉淀用乙醚再洗涤一次，干燥即得栖土曲霉蛋白酶丙酮粉粗制剂；

（4）栖土曲霉蛋白酶的纯化

上述丙酮粉粗酶用pH8.4、0.05M Tris-HCL缓冲液溶解，上DEAE-Sephadex A-25柱，然后用平衡缓冲液洗涤；层析共分离出7个峰，酶活力存在于P2峰内；收集P2峰，对水于低温下透析至无盐止，再用PEG脱水浓缩后，冷冻干燥。