[发明专利]一种用于快速检测甘蔗黑穗病菌的LAMP引物组、试剂盒及其检测方法

权利要求书

1. 一种用于检测甘蔗黑穗病菌的LAMP引物组，其特征在于，所述引物组包含一对外引物对F3/B3和一对内引物对FIP/BIP，引物序列如SEQ ID NO：1～4所示。

2. 一种用于检测甘蔗黑穗病菌的LAMP试剂盒，其特征在于，所述试剂盒含有权利要求1所述引物组。

3. 根据权利要求2所述试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还含有基因组DNA提取液、LAMP反应液、阳性对照品、阴性对照品、稳定液和显色液；所述LAMP反应液除含有权利要求1所述引物组还含有Bst DNA聚合酶和检测基础液。

4. 根据权利要求3所述试剂盒，其特征在于，所述基因组DNA提取液为CTAB提取液。

5. 根据权利要求3所述试剂盒，其特征在于，所述检测基础液为终浓度为1.3～1.5 mmol/L dNTPs、0.6～0.9 mmol/L甜菜碱和7～9 mmol/L MgSO₄。

6. 根据权利要求3所述试剂盒，其特征在于，所述阳性对照品为甘蔗黑穗病菌基因组DNA；所述阴性对照品为无菌水。

7. 根据权利要求3所述试剂盒，其特征在于，所述稳定液为石蜡油；所述显色液为SYBR Green I。

8. 根据权利要求3所述试剂盒，其特征在于，所述试剂盒的反应体系为：基因组DNA 2.5μL，8U/μL的Bst DNA聚合酶0.5μL，检测基础液19μL，0.2 μmol/L 的F3/B3引物各0.5μL，1.6 μmol/L的 FIP/BIP引物各1μL；所述检测基础液为终浓度为1.3～1.5 mmol/L dNTPs、0.6～0.9 mmol/L甜菜碱和7～9 mmol/L MgSO₄。

9. 根据权利要求3所述试剂盒，其特征在于，所述试剂盒的反应程序为63～65℃ 1 h，80～82℃ 5 min，4℃保存。

10. 利用权利要求1所述引物组或权利要求2至9任一项所述试剂盒检测甘蔗黑穗病菌的方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1. 基因组DNA提取：处理甘蔗得到甘蔗黑穗病菌基因组总DNA；

S2. 配制反应体系，在反应体系中加入稳定液，在反应管内壁加入显色液；所述稳定液的加入量为45～50 μL，显色液的加入量为1.5～2 μL；

S3. 环介导等温扩增：以基因组总DNA为模板，利用引物组经扩增得到扩增产物；所述引物组包含一对外引物对F3/B3和一对内引物对FIP/BIP，引物序列如SEQ ID NO：1～4所示；所述扩增反应的程序为63～65℃ 1 h，80～82℃ 5 min，4℃保存；

S4. 扩增产物检测：利用显色法对扩增产物进行分析，观察颜色变化，反应产物颜色变为绿色，说明待测样品含有甘蔗黑穗病菌；反应产物变为橙色，则不含有甘蔗黑穗病菌。