[发明专利]毛叶木姜子的组织培养方法

说明书

技术领域

本发明涉及植物培养技术领域，具体来说是一种利用组织培养对毛叶木姜子进行快速繁殖的方法。 

背景技术

毛叶木姜子(litsea mollifolia Chun)，樟科木姜子属落叶小乔木。目前，毛叶木姜子的组织培养研究国内外尚未见报道。其同属植物的组培研究发现，山苍子较易于建立组培快繁技术体系，而杨叶木姜子、四川木姜子等组培体系建立的效果要达到规模化生产差距仍较大。由于毛叶木姜子组培未见报道，因而只能参考同属植物，与本发明较相似的现有技术方案为一篇学术论文“木姜子组织培养技术体系研究”，但该报道仅建立了技术体系，但并未在生产上推广使用。而我们毛叶木姜子的组培生产技术是已经在进行规模化生产。 

与本发明相关的现有技术方案 

初代培养中以MS+BA2.0mg·L^-1+IBAO.5mg·L^-1为最佳组合培养基配方。依此配方确定11月中旬为取材的最佳季节,山苍子为首选树种(启动率90.3％、增殖数3.3、污染率30.3％),0.1％升汞对外植体处理时间4+4分钟效果较好。 

继代培养，培养基为：MS+BA2.0mg·L^-1+IBAO.1mg·L^-1。其增殖系数高达7.7，丛生芽多且生长适中，30天可增殖一代，年理论增殖系数6.6x10⁷。继代10次以后，用改良MS或B5代替MS可以使继代材料诱导分化恢复正常。防止交叉污染，用500mg·L^-1浓度的硫酸链霉素和500mg·L^-1浓度的硫酸庆大霉素抑菌效果较好。 

生根培养,瓶内生根培养基为：1/2MS+IBA0.5mg·L^-1+1.0mg·L^-1活性炭。以纯砂和珍珠岩1:1混合的基质成活率最高(52.0％)，瓶外带菌生根移栽用500mg·L^-1ABT溶液对插条进行基部速蘸8秒钟，插入纯砂中，生根效果较佳。 

简化培养程序,在污染率允许范围内(一般5％)可选用已煮沸过的自来水代替蒸馏水，用100℃沸水煮5分钟空培养瓶代替高压灭菌操作，可达到同样效果。 

现有技术的缺点 

1.以现有木姜子采条接种方法，所选外植体材料多为野外成年树当年生枝条带芽茎段。该方法有着明显的缺点：第一，由于野外环境恶劣，采条接种后污染均较严重(污染率多在50％以上)。第二，此方法选出来的枝条，生理状态受成年母株影响明显，成熟效应较显著，不利于诱导成苗。第三，由该方法所建立的无菌系，在规模化生产一段时间后，瓶苗内生菌情况严重(达到50％以上)。 

鉴于此，我们在采条前，进行了优树的促萌条处理。将在林分内选择好的优良单株，直接进行基部的截干或环割处理，待基部萌条产生时再采条。采条时选择两个连续晴天的午后，利用自然光的天然紫外线杀菌，所采外植体为优树基部萌条的半木质化枝条。该方法下所获得的外植体材料污染率低(一般在10％以内)，萌芽率高(一般在90％以上)，最明显的是培养后期内生菌的情况显著好转(基部萌条的内生菌发生率比下部枝条降低70％以上，而中部和上部枝条的内生菌发生率比下部枝条更高)。 

2.规模化组培生产中，随瓶苗转接次数的增多，会逐渐出现严重的内生菌污染问题，若不及时处理，会给生产造成很大损失。这类污染，主要表现为在培养基表面或材料基部出现粘液状物体、菌丝或浑浊的水浸，有时甚至出现泡沫发酵状。就现有报道的技术而言，多是采用在培养基中加入适量抗生素的办法，通过植物吸收来抑制或消除污染。但在工厂化育苗过程中，这种处理方法有着明显的缺点：首先，不同的菌类会造成不同的污染，根据污染的菌类和不同污染程度，所选用的抗生素种类和浓度会有所不同，这在实际生产中是很难精细操作的，需花费大量的人力来进行分类处理，从成本角度来说，往往是得不偿失的。其次，抗生素不可经高温灭菌，需采用过滤灭菌的方法进行操作，由于操作较麻烦和复杂，普通工人很难有效完成该步骤，这就对技术人员提出了较高的要求，不利于该组培技术的规模化推广。最后，对污染瓶苗的连续用药会使植株产生抗药性或生长受阻，但停药后又很快会再次出现污染现象，始终是治标不治本。