[发明专利]单基因编码的双或多价特异性抗HIV免疫粘附素

说明书

技术领域

本发明涉及抗HIV-1感染的新型生物剂预防和免疫治疗产品的研发，特别涉及用于有效阻断HIV-1感染的广谱高效中和免疫粘附素的基因优化、蛋白表达纯化以及中和效能的改进。

背景技术

艾滋病(HIV/AIDS)是严重威胁人类公共健康的最主要因素之一，至今已经导致了全世界累计3000万人死亡和高达3300万的病毒携带者，迄今还没有有效的治愈艾滋病的方法和疫苗。虽然目前已经有几十种广谱高效的抗HIV-1中和抗体从少数艾滋病感染者中分离出来，但是可以诱导出这种中和抗体的疫苗还一直没有被研发出来，见文献[Kwong PD,Mascola JR:Human antibodies that neutralize HIV-1:identification,structures,and B cell ontogenies.Immunity，2012,37:412-425]以及[Corti D,Lanzavecchia A:Broadly neutralizing antiviral antibodies.Annu Rev Immunol2013,31:705-742]。

面对艾滋病疫苗研制长期以来的失败结果，我们在重新思考和审视有关艾滋病疫苗的设计、疫苗免疫策略等重大科学问题的同时，对其他新型生物剂预防产品进行研发。免疫粘附素(Immunoadhesin,IA)就是其中一种，它是基于中和抗体、已经获FDA批准的用于预防和治疗的新型生物产品。

近几年来，人免疫粘附素被证明在临床上有应用潜能，是以人源单克隆中和抗体为药剂来中和外来病原体(如HIV)提供了另一种可能的方式。构建免疫粘附素的一个重要优势在于较容易在体外优化中和抗体的中和效力，包括优化提高抗体的表达、释放、半衰期和结合区域亲和力等特性。最近的研究已经证明，即使在很低的浓度条件下，有中和抗体活性的免疫粘附素能够有效保护对于猴子免于SIV的感染，见文献[Hessell AJ,Poignard P,Hunter M,Hangartner L,Tehrani DM,Bleeker WK,Parren PW,Marx PA,Burton DR:Effective,low-titer antibody protection against low-dose repeated mucosal SHIV challenge in macaques.Nat Med2009,15:951-954]以及[Johnson PR,Schnepp BC,Zhang J,Connell MJ,Greene SM,Yuste E,Desrosiers RC,Clark KR:Vector-mediated gene transfer engenders long-lived neutralizing activity and protection against SIV infection in monkeys.Nat Med2009,15:901-906]。目前，能使人免于HIV的感染的具有中和抗体活性的免疫粘附素类似产品还没有报道；针对scFv-ibalizumab(Hu5A8)，scFv-VRC01，scFv-PG09，scFv-PG16和scFv-PGT128分泌型sIgG-免疫粘附素或者分泌型sIgA-免疫粘附素的研究，也没有报道。

发明内容

本发明要解决的技术问题是构建能够由单一基因编码的具有双或多价特异抗HIV位点的分泌型免疫粘附素，其具有高效的抗病毒能力及中和广谱性，并使出现中和抗体的耐药病毒株的机率降到最低。

本发明提供了一种单基因编码的双或多价特异性抗HIV免疫粘附素，其由单个基因编码区域产生，不包含常规抗体的CL和CH1结构域，包含由灵活肽段连结而成的两个或多个抗体功能结构域scFv以及人免疫球蛋白Fc区域，且能够同时与两个或多个不同HIV相关抗原表位进行高亲和力的结合。

本发明还提供了上述单基因编码的双或多价特异性抗HIV免疫粘附素的制备方法，包括以下步骤：

步骤一：筛选目标基因，并根据目标基因构建中和抗体单链scFv基因，即VL-(Gly₄Ser)₃-VH或VH-(Gly₄Ser)₃-VL；