[发明专利]一种日本囊对虾放流效果的评估方法

权利要求书

1.一种日本囊对虾放流效果的评估方法，包括：

(1)采集日本囊对虾放流区域的野生群体和准备用于放流的繁育群体，选用线粒体序列中的片段作为研究对象，通过PCR扩增和测序，分析野生群体和繁育群体的序列差异和单倍型分布，统计各单倍型的群体内频率；

(2)筛选出代表日本囊对虾种内差异的单倍型作为分子标记，确定该标记的序列特异性，计算分子标记在野生群体中所占的比例，定期监测比例变动范围；

(3)选定在野生群体中历年所占比例变动小的分子标记，将带有选定的分子标记的母虾用于人工繁育放流用的子一代；

(4)在捕捞期回捕放流区域的个体，检测分子标记，计算带有选定的分子标记的个体在回捕群体中的比例，确定比例变动情况，从而估算放流群体对该区域所有日本囊对虾生态量的贡献值，最终确定该批次的放流效果。

2.根据权利要求1所述的一种日本囊对虾放流效果的评估方法，其特征在于：所述步骤(1)中的线粒体序列为细胞色素B基因DNA序列、D-loop区序列或COI序列。

3.根据权利要求2所述的一种日本囊对虾放流效果的评估方法，其特征在于：所述细胞色素B基因DNA序列如SEQ ID NO:1所示；对应的PCR扩增引物MJ-CYTB-F、MJ-CYTB-R序列如SEQ ID NO:2和NO:3所示。

4.根据权利要求1所述的一种日本囊对虾放流效果的评估方法，其特征在于：所述步骤(1)中的PCR反应体系为：30μL反应体系，其中包括3μL10×PCR缓冲液，引物的浓度均为10μM，上游引物和下游引物分别为0.5μL，1μL2.5mM each dNTP，0.5μL Taq DNA聚合酶，0.5μL DNA模板；补充23.5μL去离子水至30μL。

5.根据权利要求1所述的一种日本囊对虾放流效果的评估方法，其特征在于：所述步骤(1)中的PCR反应条件为：94℃预变性5min，94℃变性30s，50℃退火45s，72℃延伸70s，共28个循环，最后72℃延伸7min，10℃保存并结束程序。

6.根据权利要求1所述的一种日本囊对虾放流效果的评估方法，其特征在于：所述步骤(2)中的变动范围要求不超过5％。

7.根据权利要求1所述的一种日本囊对虾放流效果的评估方法，其特征在于：所述步骤(3)中放流前对增殖群体的母本、子代预先进行检测，以确定选定的分子标记的有效性、可检出性，并确定子一代携带的分子标记与用于繁育的母虾一致。

8.根据权利要求1所述的一种日本囊对虾放流效果的评估方法，其特征在于：连续多年对分子标记进行追踪检测，评估该批次放流的长期效果。

9.根据权利要求1所述的一种日本囊对虾放流效果的评估方法，其特征在于：不同批次的放流选用不同的分子标记，以分别评估各个批次的放流效果。