[发明专利]一种检测基质金属蛋白酶-2的生物传感器的制备方法及其应用

权利要求书

1.一种检测基质金属蛋白酶-2的生物传感器的制备方法及其应用，包括以下步骤： 

(1)将100μL的0.1～10μM肽溶液加到胶体金修饰的96孔板中，37℃反应12～60h，用Tris-HCl溶液冲洗各孔，得肽修饰胶体金-96孔板； 

(2)加10μL的0.1～2mg/mL链霉亲和素溶液于转化酶-AuNPs(转化酶修饰胶体金)溶液中，置于恒温振荡器上震荡4～32h；然后以8000～14000转速下离心，将沉淀加1mL Tris-HCl溶液分散，得链霉亲和素修饰转化酶胶体金(streptavidin-转化酶-AuNPs)； 

(3)取streptavidin-转化酶-AuNPs溶液加到肽修饰胶体金-96孔板中反应，之后用Tris-HCl溶液冲洗各孔，从而得基质金属蛋白酶-2生物传感器； 

其中：所述的胶体金修饰的96孔板按如下的方法制备而成：96孔板用无水乙醇和水依次超声处理3次，然后在37℃下干燥；将100μL胶体金溶液滴涂在处理好的96孔板中，在室温条件下使溶剂自然挥发，即得胶体金修饰96孔板(胶体金-96孔板)； 

所述的转化酶修饰胶体金按如下的方法制备而成：用NaOH溶液将胶体金溶液pH调至7.0，取0.2～2mL胶体金溶液于离心管中，然后加入500μL0.1～2mg/mL转化酶溶液，4℃反应2～12h，8000～14000转速下离心，并用PBS洗涤后分散于磷酸缓冲溶液中，即得。 

2.根据权利要求1的一种检测基质金属蛋白酶-2的生物传感器的制备方法及其应用，其特征在于所述的肽的部分如下： 

所述的肽的部分序列为CGHHYYGPLGVRGC-biotin。 

3.根据权利要求1的一种检测基质金属蛋白酶-2的生物传感器的制备方法及其应用，其中所述的金纳米粒子按如下方法制备而成：在圆底烧瓶中加入100mL、0.01％的HAuCl₄，搅拌加热至沸腾，然后快速加入1.8mL、1％的Na₃C₆H₅O₇，再加热、搅拌10分钟，冷却至室温，即得。 

4.根据权利要求1的一种利用上述方法制备的生物传感器检测基质金属蛋白酶-2含量的方法，使用不同浓度的基质金属蛋白酶-2加入基质金属蛋白酶-2生物传感器中，然后取出上清液于0.5mL小离心管中，准确加入100μL的0.5mM蔗糖溶液，37℃下反应30～180分钟，用血糖仪检测生成葡萄糖含量，以血糖仪读数为分析信号，进行基质金属蛋白酶-2的测定。 

5.根据权利要求1所述的生物传感器在检测基质金属蛋白酶-2含量中的应用。 

6.根据权利要求1所述的Tris-HCl溶液的配制方法为：称量121.1g Tris置于2L烧杯中，加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解，加入浓盐酸调节所需要的pH为8.0，即得。