[发明专利]一种检测基质金属蛋白酶-2的生物传感器的制备方法及其应用

说明书

技术领域

本发明属于分析化学与生物传感器领域，具体为一种检测基质金属蛋白酶-2生物传感器的制备方法及其应用。另外，本发明还涉及所述的生物传感器检测基质金属蛋白酶-2的方法。 

背景技术

肿瘤浸润转移的过程是肿瘤细胞与宿主相互作用的多环节过程。肿瘤细胞分泌产生多种蛋白水解酶参与降解细胞外基质。基质金属蛋白酶是其中的主要酶类，基质金属蛋白酶是一个大家族，因其需要Ca²⁺、Zn²⁺等金属离子作为辅助因子而得名。基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-7(MMP-7)除可以降解Ⅳ型胶原外，还能降解Ⅴ、Ⅶ型胶原及明胶，与肿瘤侵袭转移的关系最为密切。近年来，MMP-2的结构和功能得到了广泛、深入的研究。很多研究结果表明，MMP-2在多种疾病的病理进程中发挥着关键的作用。一些研究者根据实验结果指出，通过检测MMP-2可以估计这些疾病的病理进程，也就是MMP-2可以作为这些疾病的预后指标。据此，研制准确、灵敏、快速测定MMP-2、MMP-7活性的方法具有极高的医学应用价值。 

基质金属蛋白酶常用测定方法有酶联免疫吸附法(Patel,S.；Sumitra,G.；Koner,B.C.；Saxena,A.Clin.Biochem.2011,44,869-872)；表面等离子共振法(Pieper-Fürst,U.；Kleuser,U.； W.F.M.；Warsinke,A.；Scheller,F.W.Anal.Biochem.2004,332,160-167)；凝胶电泳法(Barbosa,F Jr.；Gerlach,R.F.；Tanus-Santos,J.E.Basic Clin.Pharmacol.Toxicol.2006,98,559-564.Yamane,T.；Mitsumata,M.；Yamaguchi,N.；Nakazawa,T.；Mochizuki,K.；Kondo,T.；Kawasaki,T.；Murata,S.；Yoshida,Y.；Katoh,R.Cell Tissue Res.2010,340,471-479)；荧光法(Lefkowitz,R.B.；Schmid-G.W.；Heller,M.J.Anal.Chem.2010,82,8251-8258)；酶切割超磁性法(Zhao,M.；Josephson,L.；Tang,Y.；Weissleder,R.Angew.Chem.,Int.Ed.2003,42,1375-1378)；磁共振成像法(Harris,T.J.；von Maltzahn,G.；Derfus,A.M.；Ruoslahti,E.；Bhatia,S.N.Angew.Chem.,Int.Ed.2006,45,3161-3165)和荧光共振能量转移法(Wang,Y.H.；Shen,P.；Li,C.Y.；Wang,Y.Y.；Liu,Z.H.Anal.Chem.2012,84,1466-1473)等。这些方法各有其优点，能不同程度的满足对基质金属蛋白酶-2的检测要求，但方法复杂，需要贵重的仪器，检测成本高。所以必须发展一种方法简单、成本低廉的新型检测方法。 

发明内容

鉴于现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种检测基质金属蛋白酶-2的生物传感器的制备方法及应用，以及提供一种采用所述的生物传感器检测基质金属蛋白酶-2的方法。 

本发明的目的是这样实现的： 

一种检测基质金属蛋白酶-2的生物传感器的制备方法，包括如下步骤： 

(1)将100μL0.1～10μM肽溶液加到胶体金修饰的96孔板中，37℃反应12～60h，用Tris-HCl溶液冲洗各孔，得肽修饰胶体金-96孔板； 

(2)加10μL0.1～2mg/mL链霉亲和素溶液于转化酶-AuNPs(转化酶修饰胶体金)溶液中，置于恒温振荡器上震荡4～32h。然后以8000～14000转速下离心，将沉淀加1mL Tris-HCl溶液分散，得链霉亲和素修饰转化酶胶体金(streptavidin-转化酶-AuNPs)； 

(3)取streptavidin-转化酶-AuNPs溶液加到肽修饰胶体金-96孔板中反应，之后用Tris-HCl溶液冲洗各孔，从而得基质金属蛋白酶-2生物传感器； 

其中：所述的胶体金修饰的96孔板按如下的方法制备而成：96孔板用无水乙醇和水依次超声处理3次，然后在37℃下干燥。将100μL胶体金溶液滴涂在处理好的96孔板中，在室温条件下使溶剂自然挥发，即得胶体金修饰96孔板(胶体金-96孔板)；