[发明专利]一种基于核酸适体来检测目标分子的酶联分析新策略

权利要求书

1.一种基于发夹结构的核酸适体来检测目标分子的酶联分析新策略的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)将检测DNA链A1固定到NHS活化的酶标板孔。洗涤酶标板。接着用BSA封闭未反应的NHS基团。再次洗涤酶标板。

2)将包含目标分子和B1链的样品溶液加入到固定了A1的酶标板口，室温反应30-50min后，倒掉反应液，洗涤酶标板。

3)将包含HRP-streptavidin的溶液加入到上步反应完毕的酶标板口，室温反应30min，倒掉反应液，洗涤酶标板。接着将TMB-H₂O₂底物液加入酶标板口，室温反应20min，HRP催化TMB-H₂O₂底物显蓝色，加酸终止反应变成黄色。

4)测黄色产物在450nm处的紫外吸收值，根据净吸收值确定检测的线性关系。实际样品的吸收值和标准曲线对照确定目标的含量。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤1)中的A1链包含靶标的酸适体序列但是比核酸适体序列长，长出来的序列和核酸适体的一段能形成发夹结构。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤1)中的A1链一端是氨基基团标记的，以便通过和NHS活化基团的反应固定到酶标板口。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于B1能和A1中非核酸适体序列互补配对，并且核酸适体和目标分子结合的能力＞A1形成发夹结构的能力＞两条DNA互补配对形成双链的能力。没有目标分子时，而有B1链的存在，A1发夹不能打开。当有目标分子时，发夹结构打开，核酸适体和目标分子结合，同时两条DNA杂交成双链。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于B1的一端事先标记了生物素基团，它能结合HRP-streptavidin，再催化TMB-H₂O₂底物显色。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于该技术检测的靶标范围广，特别适合小分子检测。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于该技术是现场快速检测技术。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：该方法可以被广泛的应用于医学诊断、生物分析、食品安全和环境监测等领域中。