[发明专利]口服热淋清颗粒后大鼠尿液和粪便中化学成分测定

权利要求书

1.大鼠口服热淋清颗粒后尿液和粪便中两种成分的测定方法，其包括以下步骤：

(1)尿液测试样品的制备：

(a)取热淋清颗粒0.5～4g，加5～10倍水溶解，通过灌胃给药方式给大鼠(体重230-270g)热淋清颗粒水溶液10mL/kg；

(b)分别在0～48h采集大鼠尿液，记录尿量，将尿液样品3000～5000r/min转速离心5～30min后，取上层液转移至新空白EP管中；

(c)加入内标岩白菜素母液10μL，然后用乙酸乙酯萃取，尿液与乙酸乙酯的体积比为1：4～1:8，萃取时间2～5min，涡旋混匀30～60s后，在0～10℃恒温下以10000～12000r/min离心5～15min；

(d)上层液转移至新空白EP管中，于30～50℃氮气流吹干，残留物用100μL流动相溶解，涡旋混匀30～60s后，在0～10℃恒温下以10000～12000r/min离心5～15min，取上清液即为尿液供试品溶液；

(e)按步骤(b)至步骤(d)的方法对未服用药物的空白尿液进行处理，得到尿液空白溶液；

(2)粪便测试样品的制备：

(a)取热淋清颗粒0.5～4g，加5～10倍水溶解，通过灌胃给药方式给予大鼠(体重230-270g)热淋清颗粒水溶液10ml/kg；

(b)分别收集48h内大鼠粪便，将大鼠粪便烘干，称重，取0.5g样品加入10倍量水制成混悬液，将样品3000～5000r/min转速离心5～30min后，取上层液转移至新空白EP管中；

(c)加入内标岩白菜素母液10μL，然后用乙酸乙酯萃取，尿液与乙酸乙酯的体积比为1：4～1:8，萃取时间2～5min，涡旋混匀30～60s后，在0～10℃恒温下以10000～12000r/min离心5～15min；

(d)上层液转移至新空白EP管中，于30～50℃氮气流吹干，残留物用100μL流动相溶解，涡旋混匀30～60s后，在0～10℃恒温下以10000～12000r/min离心5～15min，取上清液即为粪便供试品溶液；

(e)按步骤(b)至步骤(d)的方法对未服用药物的空白粪便进行处理，得到粪便空白溶液；

(f)对照品溶液的制备：分别精密称取没食子酸对照品、原儿茶酸对照品、岩白菜素对照品0.01～1mg，各自加纯甲醇定容至10ml，即得三种母液，分别取三种母液适量至同一量瓶中，加甲醇稀释至所需浓度，即为对照品溶液；

(3)LC-MS/MS分析的色谱条件和检测条件：

色谱柱为反相色谱柱，酸性乙腈或酸性甲醇：酸性水＝0～20:80～100(体积比)为流动相，流速为0.1～0.5mL/min，柱温为20～40℃，离子化方式为电喷雾条件，负模式监测，喷雾电压为2000～3000V，雾化温度为300～500℃，鞘气压力为30～50mTorr，辅助气压力为5～15mTorr，毛细管温度为200～400℃(所述的酸性乙腈或酸性甲醇或酸性水中，酸的浓度为0.05％～0.5％，所述酸选自甲酸、乙酸或其组合)；

(4)测定法：分别精密吸取对照品溶液、尿液空白溶液、粪便空白溶液、尿液供试品溶液、粪便供试品溶液5～20μL，注入高效液相色谱-质谱联用仪，测定，即得。

2.根据权利要求1的方法，其中：

步骤(1)之(a)中，通过灌胃给药方式给大鼠(230～270g)热淋清颗粒水溶液2～4ml；

步骤(2)之(a)中，通过灌胃给药方式给大鼠(230～270g)热淋清颗粒水溶液2～4ml；

步骤(1)之(b)中，分别在2h，12h，24h后采集大鼠尿液；

步骤(2)之(b)中，分别在24h、48h后采集大鼠粪便；

步骤(1)之(b)中，将尿液样品于低速离心机4000r/min离心10min；和/或

步骤(2)之(b)中，将尿液样品于低速离心机4000r/min离心10min。