[发明专利]一种检测猪瘟病毒Erns IgM抗体的ELISA试剂盒

说明书

技术领域

本发明属于生物技术和动物传染病诊断研究领域，具体涉及一种检测猪瘟病毒Erns IgM抗体的ELISA试剂盒。 

背景技术

猪瘟是由猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)引起的一种高度接触性传染病，对养猪业危害严重，是世界粮农组织和各国政府严密监控和检疫的主要传染病之一。 

CSFV属黄病毒科瘟病毒属成员，是有囊膜的单股正链RNA病毒，基因组大小约12.3kb，仅含有一个大的开放性阅读框架(ORF)。此ORF翻译成含3898个氨基酸残基，分子量约438kDa的多聚蛋白，并进一步在病毒和宿主细胞蛋白酶的作用下加工成结构蛋白和非结构蛋白，其结构蛋白和非结构蛋白在病毒RNA上的编码顺序为Npro、C、Erns(E0)、E1、E2、P7、NS2-3、NS4A、NS4B、NS5A、NS5B。其中，除C、Erns、E1和E2为结构蛋白外，其余均为非结构蛋白。 

猪感染CSFV后主要产生针对结构糖蛋白E0、E2和非结构蛋白NS3的抗体。糖蛋白E0和E2是病毒诱导机体产生中和抗体的两个主要保护性抗原，同时也是病毒吸附进入敏感细胞的必需蛋白。 

Erns是病毒的一种囊膜糖蛋白，也称gp44/48，旧称E0。有9个可能的糖基化位点，去糖基的蛋白骨架分子量约26KDa，由病毒ORF中Glu268-Ala494组成。在感染细胞中Erns在内质网内积累，并可存在于细胞膜表面或被分泌到胞外。在病毒粒子中Erns以97KDa的同源二聚体形式存在于囊膜表面。由于其分子内缺乏疏水的膜锚定区，与病毒囊膜结合力弱，易从囊膜上游离下来。Erns可诱导产生猪瘟的中和抗体，免疫猪可诱导产生对致死量CSFV的保护性免疫。由于编码Erns的核酸序列在属内比编码E2的序列保守程度高，因此Erns可作为防治猪瘟的一种靶蛋白。 

猪瘟病毒的快速检测对于猪瘟的诊断具有特别重要的意义。目前猪瘟病毒检测方法主要有应用病毒分离鉴定、免疫组织化学法、反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)和Elisa检测等。其中Elisa检测法以其快速、方便、敏感等优点，在众多方法中脱颖而出。但市场中的Elisa试剂盒多为检测抗E2抗体的试剂盒，而无对Erns IgM抗体的方面的研究。 

发明内容

本发明的首要目的在于提供一种检测猪瘟病毒(CSFV)Erns IgM抗体的ELISA试剂盒。 

本发明的目的还在于提供上述检测猪瘟病毒Erns IgM抗体的ELISA试剂盒的使用方法。 

为了实现上述目的，本发明采用的以下技术方案： 

一种检测猪瘟病毒Erns IgM抗体的ELISA试剂盒，包含有：包被抗猪IgM单克隆抗体的酶标板、样品稀释液、阳性对照和阴性对照、检测用抗原、浓缩洗涤液、酶结合物、酶显色底物和终止液。 

所述的检测用抗原为重组猪瘟病毒Erns(CSFV-Erns)蛋白，以样品稀释液溶解稀释至5-10μg/mL；优选的，所述的重组猪瘟病毒Erns蛋白通过包含如下步骤的方法制备得到：提取猪瘟病毒的RNA为模板通过反转录PCR扩增Erns蛋白目的基因，将目的基因与连接到pET30a载体上再转入含有PGrO7重组质粒表达伴侣蛋白GroEL的BL21(DE3)进行原核表达、纯化得到纯化的重组猪瘟病毒Erns蛋白；其中扩增引物为： 

CSFV-Erns基因上游引物：5’-CGGGATCCGAAAATATAACTCAGTGGAACCTGA-3’， 

CSFV-Erns基因下游引物：5’-CGCTCGAGGGCATAGGCACCAAACCAG-3’。