[发明专利]一种适用于苦苣苔科植物基因组大小的测定方法

权利要求书

1.一种适用于苦苣苔科植物基因组大小的测定方法，其特征在于，包括以下步骤：

材料准备：苦苣苔科的目的植物的新鲜嫩叶；

内参选择：仪器调试后进行样品荧光强度及基因组大小的预测，根据预测基因组大小选择番茄为主要内参，水稻为第二内参，并依据番茄基因组大小为标准对水稻基因组大小进行重新校对；

制备细胞核悬液：目的植物和内参物种，按照1ml核提取缓冲液LB01中加入20mg嫩叶的量，分别将目的植物和内参物种的嫩叶加入核提取缓冲液LB01中，然后将嫩叶切碎，用50μm孔径的过滤网过滤获得细胞核悬液，置于冰上备用，所述的核提取缓冲液LB01的配方为：15mM Tris、2mM Na₂EDTA、0.5mM spermine.4HCl、80mM KCl、20mM NaCl、15mMβ-mercaptoethanol、0.1％(v/v)Triton X-100，pH7.5；

再用RNA消化酶消化细胞核悬液中的RNA，RNA消化酶终浓度为50μg ml^-1；然后加入碘化丙啶荧光避光染色；最后应用流式细胞仪测定目的植物的基因组大小。

2.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于，所述碘化丙啶的终浓度为100μg ml^-1，染色时间为40min。