[发明专利]一种多肽、采用其体外激活的树突状细胞及其用途

权利要求书

1.一种用于体外激活树突状细胞的多肽，其特征在于，所述多肽包含示于SEQ.ID.NO.1的氨基酸序列。

2.根据权利要求1所述的多肽，其特征在于，所述多肽的氨基酸序列示于SEQ.ID.NO.1；或者

所述多肽包含彼此之间由连接肽连接的n个示于SEQ.ID.NO.1的氨基酸序列，其中n为2-4，优选为2；

优选地，所述连接肽为LLL；

更优选地，所述多肽的氨基酸序列示于SEQ.ID.NO.2、SEQ.ID.NO.3、或SEQ.ID.NO.4。

3.一种由根据权利要求1或2所述的多肽体外激活的树突状细胞，其特征在于，所述树突状细胞通过包括以下步骤的方法制备：

获取外周血单个核细胞，在含有GM-CSF和IL-4的培养基中培养，之后用根据权利要求1或2所述的多肽刺激，从而获得致敏的树突状细胞。

4.根据权利要求3所述的树突状细胞，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

1)获取外周血单个核细胞后，将单个核细胞置于容器中，静置使之形成两部分细胞，一部分贴附在容器壁上，一部分为悬浮细胞，分离其中的贴壁细胞；

2)使步骤1)中得到的贴壁细胞在含有GM-CSF和IL-4的lonza无血清培养基中培养5-9天、优选7天后，加入根据权利要求1或2所述的多肽共孵育2-10小时即可收获致敏的DC。

5.根据权利要求3或4所述的树突状细胞，其特征在于，所述方法的步骤2)中，所述培养基含有200-800IU/mL、优选500IU/mL GM-CSF，以及800-1500IU/mL、优选1000IU/mL IL-4；

优选地，共孵育时，将所述多肽加入培养基中并使之浓度为50-200μg/ml，优选100μg/ml。

6.一种用于制备体外激活的树突状细胞的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

获取外周血单个核细胞，在含有GM-CSF和IL-4的培养基中培养，之后用根据权利要求1或2所述的多肽刺激，从而获得致敏的树突状细胞。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

1)获取外周血单个核细胞后，将单个核细胞置于容器中，静置使之形成两部分细胞，一部分贴附在容器壁上，一部分为悬浮细胞，分离其中的贴壁细胞；

2)使步骤1)中得到的贴壁细胞在含有GM-CSF和IL-4的lonza无血清培养基中培养5-9天、优选7天后，加入根据权利要求1或2所述的多肽共孵育2-10小时即可收获致敏的DC。

8.根据权利要求6或7所述的方法，其特征在于，所述方法的步骤2)中，所述培养基含有200-800IU/mL、优选500IU/mL GM-CSF，以及800-1500IU/mL、优选1000IU/mL IL-4；

优选地，共孵育时，将所述多肽加入培养基中并使之浓度为50-200μg/ml，优选100μg/ml。

9.一种用于治疗结肠癌的组合物，其特征在于，所述组合物包含根据权利要求3-5中任一项所述的树突状细胞，或者包含根据权利要求6-8中任一项所述的方法制得的树突状细胞。

10.根据权利要求9所述的组合物，其特征在于，所述组合物还包含CIK细胞；

优选地，所述CIK细胞通过包括以下步骤的方法制备：

获取外周血单个核细胞，在含有IFN-γ的培养基培养，之后向培养基中加入抗人CD3抗体和IL-2，培养获得CIK细胞；

更优选地，所述方法包括以下步骤：

1)获取外周血单个核细胞后，将该单个核细胞置于容器中，静置使之形成两部分细胞，一部分贴附在容器壁上，一部分为悬浮细胞，分离其中的悬浮细胞；

2)使步骤1)中得到的悬浮细胞在含有IFN-γ的lonza无血清培养基中培养16-24小时、优选24小时后，加入抗CD3抗体，细胞每1-3天半量换液，换液时补充IL-2，培养5-9天、优选7天。