[发明专利]一种多肽、采用其体外激活的树突状细胞及其用途

说明书

技术领域

本发明涉及生物医学领域。具体而言，本发明涉及一种源于癌胚抗原的抗原多肽、其多聚体、采用其体外激活的树突状细胞、包含所述树突状细胞的药物组合物以及它们的临床应用。

背景技术

统计数据显示，我国已进入结直肠癌高发地区的行列。中国年均新发大肠癌病例13万，在癌症发病排名中，大肠癌已由第6位上升至第2位，并仍以年均4-5％的增幅在不断攀升，远高于国外2％的增幅水平。中国发达地区的大肠癌发病率较三十年前增长了两倍多，已经接近西方发达国家。2020年，中国可能有550万人罹患该病。

结肠癌起病隐匿，早期常无明显的临床表现，病情发展较慢，出现明显的症状时大多已到中晚期，死亡率仅次于肺癌和肝癌，占我国恶性肿瘤第三位。结肠癌根治术后五年存活率可达50％以上，早期病人的五年存活率可达到80％以上，而晚期只有30％左右。直肠癌五年生存率约65.2％，各期的五年生存率如下：0期：93.2％；I期：91.4％；II期：76.4％；III期：58％；IV期：14.6％。

近年来，生物治疗越来越发挥出重要的作用。上世纪80年代起，免疫学与肿瘤学的迅速发展，1982年出现淋巴因子活化的杀伤细胞(LAK)疗法，随后相继出现肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)疗法，细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)疗法和树突状细胞联合细胞因子诱导杀伤细胞(DC-CIK)疗法。

树突状细胞(Dendritic cells，DC)是目前发现的人体内功能最强大的专职抗原提呈细胞(APC)，抗原提呈效率是其它APC的100-1000倍，DC能提取、处理并递呈不同类型的抗原，激活初始T淋巴细胞，引发抗原特异性的免疫应答。未成熟的DC广泛分布于外周非淋巴组织中(除脑外)，其细胞表面高表达甘露醇受体、DEC-205，Fc受体(CD16，CD32)、补体受体(CD35)及脂多糖受体(CD1lb，CDllc)，而成熟的DC则高表达MHC I、MHC II类分子、共刺激分子，激活效应细胞从而发挥抗肿瘤的作用。

目前认为DC抗肿瘤机制主要有以下几点：一、成熟的DC能够捕获不同类型的抗原，加工处理后，通过细胞表面表达的MHC I、MHC II类分子及表面标志白细胞分化抗原CD1分子途径启动T细胞的能力，从而有效地抵制肿瘤细胞的免疫逃逸反应。同时DC还可分泌辅助性T细胞l(Th1)型细胞因子IL-12而启动CD4⁺Th免疫应答，而活化的Th细胞也能正反馈上调DC分泌IL-12，以此循环产生大量效应T细胞。二、DC通过分泌细胞因子和趋化因子选择性地趋化T细胞，并将趋化的T细胞定向迁徙至肿瘤部位。三、在肿瘤周围，DC与T细胞之间会相互产生作用，同时滤泡型DC会保留一些抗原，可使DC分泌一些生存因子而促进T细胞的生长增殖，维持T细胞免疫反应，从而延长效应T细胞在肿瘤部位的杀伤时间。四、DC可分泌细胞因子(如IL-12)等从而抑制肿瘤血管的形成。

癌胚抗原(CEA)是一种糖蛋白，主要存在于胎儿消化道上皮组织、胰脏和肝脏，正常成人鲜有表达。结直肠癌患者70％-90％显示CEA强阳性；血清CEA水平变化与结肠癌Duke分期密切相关。升高时主要见于中晚期肿瘤，进展期结肠癌(Duke分期C、D期)时阳性率可达70％以上，而Duke A、B期其敏感性只有30％左右。对于CEA水平升高的结肠癌患者，血清CEA水平与癌肿大小、有无转移存在一定关系，发生肝转移时，CEA升高更为明显。妊娠、大量吸烟以及肠道炎症、肾功能不全、结肠息肉、肝硬化、慢性肝炎、闭锁性黄疸等也可导致CEA水平增高。

因此，可以考虑开发基于CEA的抗原多肽，应用于活化免疫细胞治疗结肠癌。

发明内容

HLA-A2与HLA-A3超型在中国人中的总平均分布频率超过85％，因此使用CEA的HLA-A2/A3限制性CTL表位激活的DC，将可以适用于大部分国人的结肠癌的生物治疗。因此，发明人通过研究，获得CEA的HLA-A2/A3限制性CTL表位多肽，通过采用该多肽体外激活DC，可以活化免疫细胞，以治疗结肠癌。

因此，本发明涉及采用HLA-A02/03限制性癌胚抗原(CEA)抗原多肽或多肽多聚体，在体外激活树突状细胞，并将其用于结肠癌治疗。

具体而言，本发明的一个目的在于提供一种用于体外激活树突状细胞的多肽，所述多肽源自HLA-A02/03限制性CEA。所述多肽可以为特定序列的单体，也可以是通过连接肽形成的多聚体形式。

本发明的另一个目的在于提供一种由所述多肽体外激活的树突状细胞及其制备方法。