[发明专利]一种与香稻香气含量相关的基因OsPRO及其编码蛋白的应用在审
申请号: | 201410251807.2 | 申请日: | 2014-06-09 |
公开(公告)号: | CN104031927A | 公开(公告)日: | 2014-09-10 |
发明(设计)人: | 田华;唐湘如;潘圣刚;段美洋;肖立中;钟克友 | 申请(专利权)人: | 华南农业大学 |
主分类号: | C12N15/53 | 分类号: | C12N15/53;C12N9/06;C12N15/84;A01H5/00 |
代理公司: | 广州粤高专利商标代理有限公司 44102 | 代理人: | 林丽明 |
地址: | 510642 广*** | 国省代码: | 广东;44 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 香气 含量 相关 基因 ospro 及其 编码 蛋白 应用 | ||
1.与香稻香气含量相关基因OsPRO在改善香稻香气含量中的应用;所述基因OsPRO的cDNA全长序列如SEQ ID NO:1 所示。
2.与香稻香气含量相关蛋白OsPRO在改善香稻香气含量中的应用;所述OsPRO蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:2 所示。
3.与香稻香气含量相关蛋白OsPRO在制备改善香稻香气含量药剂中的应用。
4.一种对香稻香气含量进行改造的方法,其特征在于,将基因OsPRO转化水稻细胞,再将转化后的水稻细胞培育成植株;所述基因OsPRO的核苷酸序列如SEQ ID NO:1 所示。
5.一种制备香气改善型转基因水稻的方法,其特征在于,包括如下步骤:
S1.构建表达载体
S11.利用SEQ ID NO:3所示引物OsPRO-F和SEQ ID NO:4所示引物OsPRO-R,以水稻cDNA为模板进行PCR扩增,回收、定量、连接到相同双酶切的植物表达载体中;
S12.连接产物经过透析膜透析后,转化DH10B感受态细胞;
S13.双酶切检测,得到含有OsPRO基因的阳性植物表达载体;
S2.转化愈伤组织
S21.利用农杆菌介导的方法,将上述含有OsPRO基因的植物表达载体转化水稻成熟胚的愈伤组织;
S22.转化后的愈伤组织经过预分化、分化,得到转化植株;
S3.阳性的转基因植株鉴定
利用SEQ ID NO:5所示引物1和SEQ ID NO:6所示引物2,对S22所述转化植株进行PCR鉴定,得到阳性转基因植株;
S4.纯合子的筛选
将S3所述阳性转基因植株进行培育繁殖,提取T1代转基因植株叶片基因组DNA,通过Southern Blot检测插入基因的拷贝数,选择单拷贝的转基因植株分单株收取种子,然后将种子发芽后利用潮霉素进行筛选,存活下来的即为纯合子。
6.根据权利要求5所述制备香气改善型转基因水稻的方法,其特征在于,步骤S11所述植物表达载体为pCAMBIA1380、pCAMBIA3301、pCAMBIA1300、pCAMBIA2301或pBI121。
7.根据权利要求6所述制备香气改善型转基因水稻的方法,其特征在于,所述植物表达载体为pCAMBIA1380;步骤S11所述双酶切为HindIII和MluI酶切。
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