[发明专利]一种小球藻抗氧化肽的制备方法

权利要求书

1.一种小球藻抗氧化肽的制备方法，其特征在于所述方法包括以下步骤：

(1)小球藻干粉加入蒸馏水混匀，所述蒸馏水的体积用量以小球藻干粉质量计为20mL/g，4℃下搅拌1～3h，得到小球藻混合液，小球藻混合液在-70℃下冷冻12h，再于30℃下解冻至4℃，在不断搅拌下向解冻后的小球藻混合液中加入NaOH，使NaOH的质量终浓度为1～4％，得到碱性混合液，然后将碱性混合液在4℃下超声破壁处理1～2h，调pH值为7.0，离心分离，取上清液，加入体积为上清液体积4倍的体积分数95％的乙醇，搅拌1～10分钟后，静置5～6小时，再次离心，弃去上清液，取沉淀用蒸馏水清洗，然后用少量蒸馏水溶解，浓缩、冷冻干燥制得小球藻蛋白；

(2)小球藻蛋白加0.5mol/L的PBS缓冲液配成6mg/mL浓度的底物水溶液，按酶与底物的质量比1:25加入复合蛋白酶、复合风味蛋白酶、中性蛋白酶或碱性蛋白酶，在各种酶的最佳反应温度和反应pH条件下，进行酶解反应，反应0.5～5h，然后将酶解液升温至90～95℃反应15～30min，结束酶解反应，所得反应液浓缩至原体积的1/4，冷冻干燥，制得小球藻抗氧化肽。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述步骤(2)中，复合风味蛋白酶的反应条件为pH值6.0，反应温度50℃；碱性蛋白酶的反应条件为pH值8.0，反应温度55℃；复合蛋白酶的反应条件为pH值6.0，反应温度50℃；中性蛋白酶的反应条件为pH值6.0，反应温度45℃。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述步骤(2)中，向底物水溶液中加入复合风味蛋白酶进行酶解反应，反应条件为pH值6.0，反应温度50℃。

4.如权利要求1～3之一所述的方法，其特征在于所述步骤(2)中，酶解反应的时间为5小时。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述步骤(1)按以下步骤操作：

小球藻干粉加入蒸馏水混匀，所述蒸馏水的体积用量以小球藻干粉质量计为20mL/g，4℃下搅拌1～3h，得到小球藻混合液，小球藻混合液加入高压均质机中，调节压力至100MPa，处理15～20次，然后在4℃、不断搅拌下向高压均质后的小球藻混合液中加入NaOH，使NaOH的质量终浓度为1～4％，得到碱性混合液，然后将碱性混合液在4℃下超声破壁处理1～2h，调pH值为7.0，离心分离，取上清液，加入体积为上清液体积4倍的体积分数95％的乙醇，搅拌1～10分钟后，静置5～6小时，再次离心，弃去上清液，取沉淀用蒸馏水清洗，然后用少量蒸馏水溶解，浓缩、冷冻干燥制得小球藻蛋白。