[发明专利]一种小球藻抗氧化肽的制备方法

说明书

(一)技术领域

本发明涉及一种小球藻抗氧化肽的制备方法。

(二)背景技术

自由基(Free radicals)是人体生命活动中各种生化反应的中间代谢产物，由于其单电子的结构而表现出极其活泼的不稳定性，在生物体内主要包括超氧阴离子自由基(O₂^-·)、过氧化氢(H₂O₂)、羟基自由基(·OH)、氧有机自由基(RO·)、有机过氧基(ROO·)、活性氧(ROS)、脂自由基(L·)和脂过氧基(LOO·)等。具有活性的自由基对一般的组织和生物膜都可产生不同程度的危害，因此自由基在生理、病理上的作用机理受到了广泛的关注，越来越多的学者投入相关的研究中。

存在在人体内的氧自由基主要有两个方面的来源：外源性和内源性。“外源性自由基”是由紫外线或环境污染等外来因素引发；“内源性自基”一般是在生物新陈代谢的过程中，由人体内生化反应所产生。在机体正常代谢活动中，机体内抗氧化系统能将自由基的产生和清除维持在平衡状态。但外界的逆境环境或机体的衰老导致的抗氧化系统功能的下降会引发自由基的过量积累，过量的自由基会给机体造成不可逆转的氧化损伤，造成机体在分子水平、细胞水平及组织器官水平的各种损伤，加速机体的衰老，形成恶性循环，引发包括心脏病、老年痴呆症、癌症、糖尿病、帕金森病、阿尔茨海默病和动脉粥样硬化在内的多种疾病。

近年来,随着海洋资源的不断开发，海洋生物资源也大量地被列入研究行列中，海洋资源成为了新能源开发不可或缺的一部分。人们在对海洋生物的研究中，不断地从海洋生物中发现一些具有抗氧化活性的化合物， 多糖、蛋白质、多肽乃至氨基酸都出现不同程度的抗氧化活性。海洋生物抗氧化物质可通过各种途径清除内源性和外源性自由基,具有抗氧化作用强、种类多、结构复杂、副作用低等特点。从海洋生物中寻找新的天然抗氧化活性物质、新的抗衰老药物已成为海洋药物研究的重要目标之一。

地球上有3万多种不同的微藻，分布在淡水和海洋里，在各种土壤(包括酷暑和寒冷的荒芜环境)里也都有微藻存在。人类最初对微藻的利用是简单的动物饲料，后来开始出现部分微藻食品或者保健品，但是这些产品对微藻这种天然高效能源的利用率还有待提高。近几十年来，人们逐渐注重微藻生物活性物质的研究和开发。微藻所含有的活性成分具有重要经济价值，在医药、保健品、饲料、化工和环保等方面有广泛的应用，微藻中含有大量蛋白质，优质的人工微藻蛋白质含量普遍可以达到50％以上。微藻蛋白质提取物具有一定的抗氧化性，这些提取物在一定条件下水解后的产物具有更高效的抗氧化特性。从海洋藻类中提取天然抗氧化药物的研究有待进行。

来源于天然蛋白质的水解抗氧化肽近年来逐渐成为研究热点。Suetsuna等从酪蛋白的胃蛋白酶酶解物中发现了具有自由基清除活性的肽。等在文章中指出，WIP酶解物在分子量小于6kD的时候具有较明显的抗氧化活性。Hernández-Ledesma等在做β-乳球蛋白和α-乳清蛋白水解产物的抗氧化性的过程中，对商业蛋白酶(胃蛋白酶、胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、嗜热菌蛋白酶和Corlose PP)进行了详细的对比，在结论中表示，Corlose PP蛋白酶的水解产物具有较高的抗氧化活性，其抗氧化组分分子量小于3kD。Zeng WeiCai等使用凝胶过滤层系、高效液相色谱等分离手段在牛毛中提取了一种大小为18.7kDa的多肽，具有显著的抗氧化能力，能有效防止油脂的氧化。Seung-Jae Lee等利用反相高效 液相色谱在鸭子皮肤中提取了一种大小为941Da的抗氧化肽，具有保护肝脏免受酒精损害的活性，该多肽在细胞环境中能够参与细胞凋亡的相关途径的调节。Zhang Yufeng^[28]等在罗非鱼鱼皮中提取出两种抗氧化肽，氨基酸序列分别为Glu-Gly-Leu(317Da)和Tyr-Gly-Asp-Glu-Tyr(645Da)，并指出multifect neutral和properaseE两种酶可以作为高抗氧化性肽制备用酶。

自然界中微藻有3万多种，但目前被人类利用开发的只有十余种。小球藻(Chlorella pyrenoidosa FACHB5)是一类普生性单细胞藻类。小球藻具有生态分布广、可快速生长和繁殖、易于培养等优点，是地球上动植物中唯一能在20h增长4倍的生物，具有很高的应用价值。以小球藻酶水解抑菌肽作为天然防腐剂用于食品中来达到抑菌的目的，不但在食品加工业将有广阔的应用前景，并且在环境保护等方面做出了一定贡献。

(三)发明内容

本发明目的是提供一种以小球藻为原料制备抗氧化肽的方法。