[发明专利]改性聚丙烯腈树脂柔性固定化木瓜蛋白酶的方法

权利要求书

1.改性聚丙烯腈树脂柔性固定化木瓜蛋白酶的方法，其特征是包括以下步骤：

1)、制备柔性载体，依次进行以下步骤：

①、聚丙烯腈树脂改性：

按照每1g聚丙烯腈树脂微球配用250～350mL的反应溶剂的比例，将聚丙烯腈树脂微球加入至反应溶剂中浸泡20～28h，从而使聚丙烯腈树脂微球充分溶胀；然后加入作为亲水性柔性基团的四乙烯五胺，NaOH作为催化剂，接通氮气，在氮气保护下先以150～200rpm的搅拌速度在20～30℃的常温下搅拌1.5～2.5h；然后继续在氮气保护下于70℃～90℃、以150～200r/min的转速搅拌反应9～11小时；过滤后，得改性后的聚丙烯腈树脂微球；所述聚丙烯腈树脂微球：四乙烯五胺：NaOH的重量比为1：11.89：0.12，

②、改性后的聚丙烯腈树脂微球用反应溶剂浸泡洗涤至洗涤液为无色，再依次用去离子水、乙醇、乙醚洗涤，然后用去离子水洗涤，接着依次进行碱洗、水洗、酸洗和水洗，40～60℃下干燥至恒重，得改性后的聚丙烯腈柔性载体；

所述反应溶剂为乙二醇；

改性后的聚丙烯腈柔性载体为

2)、载体的活化：

取1g改性后的聚丙烯腈柔性载体，用8～12ml的pH为6.5～8.5的磷酸缓冲液浸泡20～28h，从而使改性后的聚丙烯腈柔性载体充分溶胀；然后过滤分离，得浸泡后PAN-TEPA；

在浸泡后PAN-TEPA中加入体积浓度为4％的戊二醛8～12ml，于25℃交联反应7～9h时后，过滤，所得滤饼依次用去离子水、pH为6.5～8.5的磷酸缓冲液洗涤后，于40～60℃下真空干燥至恒重，得到戊二醛活化的聚丙烯腈柔性载体；

3)、制备固定化木瓜蛋白酶：

将戊二醛活化的聚丙烯腈柔性载体浸泡在8～12ml的pH为6.5～8.5的磷酸缓冲液的锥形瓶中，然后加入木瓜蛋白酶，所述木瓜蛋白酶与戊二醛活化的聚丙烯腈柔性载体的质量比为：0.08～0.10:1，于25～35℃恒温振荡2～4h后，过滤分离；

所得滤饼用pH为6.5～8.5的磷酸缓冲液进行反复冲洗后，于36～38℃的真空干燥器中干燥4.5～5.5h后，得固定化木瓜蛋白酶；

所述pH为6.5～8.5的磷酸缓冲液为0.1mol/L的pH 7.0的磷酸缓冲液。