[发明专利]一种利用SNP提高白桦细胞中总三萜和齐墩果酸含量的方法有效
申请号: | 201410260611.X | 申请日: | 2014-06-12 |
公开(公告)号: | CN104031970B | 公开(公告)日: | 2017-01-25 |
发明(设计)人: | 詹亚光;曾凡锁;辛颖;刘堃;齐凤慧;范桂枝;尹静;由香玲 | 申请(专利权)人: | 东北林业大学;詹亚光;曾凡锁 |
主分类号: | C12P33/00 | 分类号: | C12P33/00 |
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地址: | 150040 黑龙*** | 国省代码: | 黑龙江;23 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 利用 snp 提高 白桦 细胞 中总三萜 果酸 含量 方法 | ||
1.本专利提出NO促进白桦三萜合成技术为:以白桦花药悬浮细胞为实验材料,按50g/L接种量接种于100mL B5液体培养基中,培养条件为:120rpm,25℃,光照强度2000lx,光周期16h,湿度40%~50%,培养周期为10d。培养基成分为B5基本培养基,附加激素及浓度为0.1~0.3mg/L6-BA和0.5~4.0mg/L TDZ,蔗糖20g/L,酸水解酪蛋白1g/L,pH5.5~6.0,121℃高温高压灭菌20min。在细胞悬浮培养第8天加入SNP使其终浓度为1mmol/L,培养12h后收获,齐墩果酸含量最高为1.3089mg/gDW,是对照组的569%。培养48h收获,细胞内总三萜含量达到23.86mg/gDW,为对照组的143.20%。
2.根据权利要求书1所述的方法,其中的液体培养基为为B5基本培养基,附加激素及浓度为0.1~0.3mg/L6-BA和0.5~4.0mg/L TDZ,蔗糖20g/L,酸水解酪蛋白1g/L。
3.根据权利要求书1所述的方法,其中的白桦花药细胞接种量为5g鲜细胞含100ml培养液的250ml三角瓶中,摇床转速120r/min。
4.根据权利要求书1所述的方法,其中SNP溶液通过0.22um无菌膜过滤除菌,在悬浮培养第八天加入,培养周期为10天,且SNP的终浓度为1mmol/L。
5.根据权利要求书1所述的方法,其中的收获时间为SNP添加12-24h后收获悬浮细胞。
6.根据权利要求书1所述的方法,其中SNP处理后齐墩果酸含量最高为1.3089mg/gDW,是对照组的569%。细胞内总三萜含量达到23.86mg/gDW,为对照组的143.20%。
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